10呋喃西林快速检测试剂盒说明书

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1、2010-01版呋喃西林代谢物（SEM）快速检测试剂盒说明书一、原理本试剂盒采用间接竞争ELISA方法检测水产和鸡肉等组织样本中的SEM，在微孔条上预包被上偶联抗原，利用抗原与抗体的特异性免疫化学反应的原理来进行的，样本中的SEM和微孔条上预包被偶联抗原竞争抗呋喃西林代谢物的衍生物抗体，加入酶标记物后，用TMB底物显色，样品中的SEM含量与样品的吸光度值呈反比，与标准曲线比较即可得出呋喃西林代谢物含量。二、试剂盒技术指标：试剂盒灵敏度：0.1ppb样本检测下限：组织（鸡/鸭/猪/牛/羊/鱼/虾肉）—---——0.2ppb肝脏（鸡/鸭/猪/牛/羊肝脏）--------———0.2ppb蜂蜜、牛

2、奶、肠衣--------------------------—0.2ppb鱼/虾等水产品组织因存在一定的干扰，检测下限为0.3ppb交叉反应率：呋喃西林代谢物—————————100%呋喃它酮代谢物—————————﹤0.1%呋喃妥因代谢物——————————﹤0.1%呋喃唑酮代谢物—————————﹤0.1%回收率：组织、肝脏……………………………90%±15%蜂蜜、牛奶、肠衣……………………80%±15%三、试剂盒组成1、微量测试孔：每条8孔，一板12条2、标准液X6瓶：（1ml/瓶）0ppb、0.1ppb、0.3ppb、0.9ppb、2.7ppb、8.1ppb3、酶标记物12ml………

3、………红色帽4、抗体工作液7ml……………蓝色帽5、底物A液　7ml………………白色帽6、底物B液　7ml……………黑色帽7、终止液　7ml……………黄色帽8、20X浓缩洗涤液40ml……………白色帽9、2X浓缩复溶液50ml……………透明帽10、衍生化试剂　　10ml……………白色帽四、所用仪器、试剂具备的仪器：微孔酶标仪、打印机、均质器、氮气吹干装置、振荡器、离心机、刻度移液管、天平（感量0.01g）微量移液器：单道20µl-200µl，100µl-1000µl、多道250µl试剂：氢氧化钠、乙酸乙酯、正己烷、浓HCl、磷酸氢二钾（所有样本使用）、亚硝基铁氰化钾（K2Fe（CN）5·NO

4、·3H2O）、ZnSO4·7H2O（奶样专用）五、样本前处理步骤样本处理前须知处理任何样本时，都必须注意：（a）本试剂盒所检测的组织样本包括：动物组织、禽类和水产组织。eg:鸡、鸭、牛、兔、鱼、虾等。（b）实验中必须使用一次性吸头，在吸取不同的试剂时要更换吸头。（c）实验之前须检查各种实验器具是否干净，必要时可对实验器具进行清洁，以避免污染干扰实验结果。样本前处理需配制：配液1：用去离子水将2×浓缩复溶液按1：1稀释，用于样本提取后的复溶配液2：C液：（供奶样用）称12.5g亚硝基铁氰化钾用去离子水定溶至100ml。D液：（供奶样用）称29.8g硫酸锌用去离子水溶解定溶至100ml。配液3：

5、0.1MK2HPO4称22.8gK2HPO4·3H2O加去离子水溶解定溶至1L配液4：1MHCl称l取8.6ml浓HCl加水定溶至100ml。配液5：1MNaOH称取4gNaOH加水定溶至100ml。样本的处理方法：(a)奶样1、取出5ml的奶样本到玻璃离心管中,分别加入C液和D液各250µl。2、用振荡器充分混合样本,用恒温离心机4000r/min以上离心10min(4-12℃).若没有恒温离心机,则先将样本降温至大约8℃,然后离心。3、接(b)的描述方法(b)组织、蜂蜜、肠衣、肝脏1、取1±0.05g的均质样本(组织、蜂蜜、肠衣、肝脏)、牛奶的离心上清液1.1ml（相当1ml奶样），分别

6、加入4ml的去离子水，0.5ml1MHCl和100µl衍生化试剂，充分振荡。2、置于37℃过夜孵育（大约16h）或56℃水浴中孵育(2h)；3、分别加入5ml0.1MK2HPO4，0.4ml1MNaOH和10ml的乙酸乙酯，充分振荡5min；4、在室温下（20-25℃）4000r/min以上离心10min。5、取出5ml的乙酸乙酯到另一洁净容器中于50℃氮气/空气吹干。6、用1ml正己烷溶解干燥物，用1ml已稀释好的复溶液充分混合30s；在室温下（20-25℃）4000r/min以上离心5min。7、取50µl下层相用于分析。样本稀释倍数：2六、酶标免疫分析程序1、从4℃冷藏环境中取出所需试

7、剂，置室温（20-25℃）平衡30min以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀。2、取出需要数量的微孔及框架，将不用的微孔放入自封袋，保存于2-8℃。3、配液：将40ml浓缩洗涤液（20倍浓缩）用去离子水按照1：19稀释（1份浓缩洗涤液+19份去离子水），或按所需用量配制洗涤液。4、编号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。5、加标准品/样本50µl/孔到