奶粉中金黄色葡萄球菌的检测

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1、奶粉中金黄色葡萄球菌的检测一、【实验步骤】1.样品的采集和送检采取10包小型包装的奶粉，注意要采取整件包装及包装的完整性。2.检样处理用75%酒精棉球擦拭消毒袋口后，手戴消毒手套，以无菌刀打开袋口，无菌杓对10个包装进行取样，注意每取一个样品时更换新的无菌刀，杓。在铺有等大无菌硫酸纸的精度为0.1g的分析天平上分别秤取10个样品各25g并放入10个装有玻璃珠的三角烧瓶内，每秤取一个新样品时更换新的无菌硫酸纸，用记号笔在烧瓶底部分别编号为1~10，用1个200ml的灭菌量筒和1个50ml灭菌的量筒分别

2、量取200ml和25ml已用电炉温热的灭菌生理盐水共225ml徐徐加入1号三角烧瓶内（先加少许使奶粉调成糊状，再全部加入，以免奶粉结块），振摇均匀，使充分溶解后即为1：10稀释液。2~10号烧瓶操作与1号相同。小结：这一过程需要的仪器试剂有75%酒精棉球一包，消毒手套一双，无菌刀十个，无菌杓十个，无菌硫酸纸20张，精度0.1g的分析天平一台，300ml装有玻璃珠的三角烧瓶十个，记号笔一支，200ml灭菌量筒一个，50ml灭菌量筒一个，灭菌生理盐水10L，1L大烧杯2个。3.增菌培养用电炉将7.5%N

3、aCl肉汤培养基加热至融化，取10个直径9cm的无菌平皿用记号笔在平皿底部分别编号为1~10，用一个50ml的灭菌量筒量取45ml融化的培养基倒入1号平皿中，用一支5ml的无菌吸管吸取一号烧瓶中的稀释液5ml加入1号平皿中，2~10号样品按同法制成相应的2~10号平皿，注意每吸取一个样品需要更换一支新的5ml灭菌吸管。将这十个平皿置于37℃温箱培养24h。看到样品在肉汤中呈浑浊生长。小结：这一过程需要的仪器试剂有电炉一台，37℃温箱一台，直径9cm的无菌平皿10个，记号笔一支，50ml的灭菌量筒量一

4、个，5ml的无菌吸管十支，锥形瓶一个，2L烧杯一个。4.分离培养用一支用酒精灯火焰充分消毒并凉至室温的接种针取一个平皿的增菌培养物划线接种至血平板和Baird-Parker平板（注意接种下一个平皿中的增菌培养物时要用酒精灯火焰消毒接种针）在平板底部用记号笔标记其所来自样本的编号，将其置于37℃温箱培养24h取可疑菌落（金黄色葡萄球菌在血平板上菌落为金黄色，有时也为白色，大而突起、圆形、不透明、表面光滑，周围有溶血圈。在Baird-Parker平板上的菌落较小，圆形、光滑突起、湿润，直径2~3mm，灰

5、黑到黑色，边缘为淡色，周围为一圈浑浊带，在其外层有一透明圈。用接种针接触菌落似有奶油树胶的硬度，偶然会遇到非脂肪溶解的类似菌落，但无浑浊带和透明圈）作革兰染色镜检，金葡菌为革兰阳性球菌，葡萄状排列，无芽孢，无荚膜，根据此特性，将可疑菌落同法接种于琼脂斜面及普通肉汤中，分别相应标记为1~10号，37℃培养24h，作进一步鉴定。小结：这一过程需要的仪器试剂有酒精灯一个，火柴一盒，接种针一支，37℃温箱一台，血平板和Baird-Parker平板各十个，显微镜一台，琼脂斜面及普通肉汤管各10个,1L烧杯2个

6、。5.血浆凝固酶试验（1）玻片法：取干净玻片一块，用记号笔将玻片划成两格，背面标记为1，用两支吸管分别滴加新鲜兔血浆及生理盐水各一滴，用两支用酒精灯火焰充分消毒并凉至室温的接种针挑取步骤4中1号琼脂斜面的待检菌落分别于血浆和生理盐水混合，立即观察结果，同法处理其余九个样品。每挑取一次待检菌后均需要对接种针在酒精灯火焰上消毒并凉至室温。如血浆中有明显颗粒出现，而生理盐水中无自凝现象即为阳性。小结：这一过程需要的仪器试剂有干净玻片十块，记号笔一支，新鲜兔血浆15ml，生理盐水100ml，100ml、20

7、0ml烧杯各一个，酒精灯一个，接种针一个。（2）试管法:用一支10ml的吸管吸取新鲜兔血浆10ml置于一个100ml的烧杯中，用一个50ml的量筒量取40ml生理盐水倒入盛有新鲜兔血浆的烧杯中，轻振混匀，此即1：4血浆，用一支1ml的吸管吸取0.5ml混合液放入标记为1号的小试管中，再用一支1ml的吸管吸取培养24h的1号待检菌株肉汤培养物0.5ml，同法处理其余九个样品，编号，将十个试管轻振混匀后放入37℃温箱中，同法处理其余九个个样品，试管外壁相应编号为1~10。每半小时观察一次，观察6h同时分

8、别在已知阴性和阳性葡萄球菌肉汤培养物及肉汤培养基中加入1：4血浆0.5ml，分别标记为a、b、c，作为对照，分别用记号笔按下表编号为1~4（表1）表一金黄色葡萄球菌血浆凝固酶试验（试管法）试管血浆（1：4）细菌培养液肉汤a0.5ml已知阳性菌0.5ml__b0.5ml已知阴性菌0.5ml__c0.5ml____0.5ml1~100.5ml待检菌0.5ml__通常在3~4h出现血浆凝固。观察时将试管倾斜或倒置，如呈现凝块者被认为是阳性。多数情况下玻片法与试管法二者结果平