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时间:2018-07-11
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精液处理方法在人工授精中选择【摘要】精液处理是辅助生育技术中人工授精所必须的。目的:将非正常的精液处理后达到符合WHO要求的活动精子密度和活力;减少或去除精浆内前列腺素、免疫活性细胞、抗精子抗体、细胞与碎片;降低精子的粘稠度。除了精子本身受精功能障碍或卵子异常外,精液处理方法的选择和效果也是重要的原因之一。方法:本文采用两次洗涤、上游、非连续梯度离心三种基本方法,来处理不同的精液标本。结果:精液处理后的活率和妊娠率分别为:>60%29.5%(20%19.2%)、>95%32.8%、>85%30.5%。结论:不同的方法对不同精液标本的处理,可以从体外提取形态正常、无精浆和其它成分的优质活精子,增加精子的运动能力和穿卵能力,以及体外精子获能等。做人工授精使之有效地与卵结合,提高妊娠率[1]。【关键词】精液处理;人工授精;妊娠率1材料与方法1.1精液标本的收集1.1.1取精前一般禁欲5~7天,通过手淫的方式取精液,收集在无菌、无毒的取精杯内,如不成功,可通过性交将精液收集于无毒的避孕套内。1.1.25 粘稠或有精子抗体的精液,可以收集在一个含有培养液的取精杯内;若精液量少于1ml,最好分次收集射精的精液标本。1.1.3逆射精:向病人仔细地解释整个过程,取得他的合作理解;在试验前一晚的9时,要他将4gNaHCO3冲一杯水,溶解后服下;在取样前一小时,他必须再饮一杯含4gNaHCO3的水,并且再多饮1~2杯水;在射精前排尿(即小便后立即射精);射精后他将小便排入一含有5%血清HEPES-HTF液的容器内;逆射出的精子必须立即检查和处理。1.2精液处理1.2.1试剂①Hepes-HTF(InVitroCare公司);②SSS(IrvineScientific公司);③Isolate(IrvineScientific公司);④10%SSSHepes-HTF液(1ml②+9ml①)。1.2.2精液处理方法[2]1.2.2.1两次洗涤法一份精液加一份④稀释,300g离心10分钟,去上清,沉淀加1ml④悬浮,离心洗涤两次后,沉淀加0.5ml④悬浮做授精用。1.2.2.2上游法方法一:上述洗精第二遍离心沉淀,弃去上清,轻轻指弹试管底让沉淀松散,小心沿着管壁加1ml④置37℃的CO2培养内孵育30~60min,吸出沉淀上方呈云雾状的上游精子层培养液0.5ml悬浮做授精用。5 方法二:将精液标本置试管底部,小心沿着管壁加入含有2ml④倾斜45度置37℃的CO2培养内孵育90min,收集云雾状的上层培养液再次离心300g×10min,沉淀用0.5ml④悬浮做授精用。1.2.2.3Isolate非连续梯度离心法取一支15ml尖底离心管,先加1~2mlUpper液,后加1~2mlLower液于底部(每层梯度量必须是1∶1,若精液差,应适当减少每层梯度用量),再加精液离心300g×20min,去上清;连续悬浮离心两次,200g×10min,去上清,沉淀加0.5ml④悬浮做授精用(③、④用前只需预热即可,不得放CO2培养)。2结果精液处理前应取少许精液做常规检查:测量精液量、精子浓度、活率及活力,并根据检查结果选择处理方式。从2006年1月~2007年12月共作113份标本分析,见表1。3讨论5 在人工授精中,选择好精液处理方法是人工授精取得成功的关键因素。精子数目正常,活动力好,比较清洁的精液标本或向前运动精子总数(a+b)级低于200万的病人,虽然用非梯度离心法处理精液活率会增加,但Isolate对精液有一定的影响,所以两次洗涤法适合精子活力尚可、精液不液化的患者,但是多次的洗涤和离心会对精子微观结构造成破坏,同时长时间的操作会增加活性氧的含量[3]。精液粘稠度高或不液化不适宜上游法,因为精子必须克服重力来游动,虽然上游法处理的精液可达到100%,但一般上游法的回收率较低。Isolate非连续梯度离心法适合正常精液、精液极度粘稠、精子密度低下及精子活动力低的精液标本[4],离心效果和临床妊娠率较高[5],但是,由于不可能将离心液的成分清除彻底,有可能对受孕造成影响。在以上方法使用中,尽量本着去繁就简的原则,如果一种方法解决不了时,可使用两种或两种以上的方法综合应用来提高优化效果。参考文献1CarrelDT,EwingL,ModerC,ela1.AnevaluationofVarioustreatmentstoincreasespermpenetrationcapacityforpotentialuseinaninvitrofertifizationprogram[J].FertilSteril,1992,57:134-136.2庄广伦,周灿权,梁晓燕.现代辅助生育技术[M].北京:人民卫生出版社,2005,6.3商学军,熊承良,夏文家,等.活性氧与弱精子症[J].国外医学•计划生育分册,2001,(5)20:18-20.4BeerninkEJ,SouthwickGJ,YatesCD,etal.Sexpreselectionthroughalbumnseparationofsperm[J].FertilSteril,1993,59(2):382-386.5 5XuL,LuRK,ZhengYL,etal.Comparativestudyonefficacyofthreesperm―separationtechniques[J].AsiaJAndrol,2000,2(2):131-134.[收稿日期:2009-03-02]5
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