革兰氏阴性菌脂多糖检测操作sop文件

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1、细菌内毒素脂多糖（LPS）测定规范操作1.目的建立细菌内毒素脂多糖（以下简称内毒素）检测标准操作规范，保证实验结果的准确性。2.授权操作人经培训合格的微生物实验室检验人员。3.实验原理内毒素检测原理：细菌内毒素脂多糖（LPS）激活酶反应主剂中的C因子，活化的C因子再激活B因子后形成凝固蛋白，根据其所引起的浊度变化对脂多糖浓度进行定量测定。4．产品性能指标4.1灵敏度5pg/ml4.2精密度批间CV≤10%。4.3准确性回收率75-125%。4.4标准曲线相关系数r绝对值≥0.980。5．实验组成5.1实验仪器及器具：MB-80微生物快速动态检测系统

2、、洁净工作台、低速离心机、恒温仪，20~200µl加样器、100~1000µl加样器、旋涡混合器、定时器。5.2实验耗材：200µl无热原吸头、1000µl无热原吸头、无热原平底试管、无热原真空采血管。5.3试剂盒组成：革兰阴性菌脂多糖检测试剂盒（光度法）：试剂盒包括反应主剂和样品处理液。6．工作环境相对湿度：20%~80%；温度控制：10~30℃；电源电压：220V±10%，50Hz±2%。7．标本采集及保存7.1检测样本：血液、脑脊液、胸腹水、肺泡灌洗液等。7.2采集要求：采样过程要求无菌操作，用专用的无热原真空采血管（肝素类抗凝）。常规病人早

3、上用药治疗前采血/取样（血透患者透析前采血）。7.3样本保存：样本采集后应在3000转/分进行离心，若不能及时检测，应将血浆转移至无热原转移管内，在-20℃冰箱中冷冻保存，一周内使用。8．操作程序8.1打开MB-80微生物快速动态检测系统主机、电脑及恒温仪预热30min。8.2打开MB-80微生物快速动态检测系统软件，录入病人信息、样本种类及检测项目等信息后点击采集。8.3血液前处理过程，无菌操作，用专用无热原真空采血管（肝素类抗凝）抽取静脉血4ml轻轻混匀，按转速3000r/min进行离心1分钟，得到富含血小板血浆。8.4取上述富含血小板血浆10

4、0µl，加入到样品处理液中，轻轻摇匀10秒后插入恒温仪加热区中进行70℃干热10min。8.5干热结束后，将前处理液冷却5min，至室温后取出（取出时切忌震荡）。8.6取上述前处理液中上清液200µl加入到反应主剂中，轻轻混匀（一般混匀10秒即可），待完全溶解至透明后，全部移液至平底试管中(不要产生气泡)，立即插入MB-80微生物快速动态检测系统中进行检测。8.7反应结束后仪器自动计算结果并保存。待测血浆样品制备、检测示意图9．操作注意事项9.1预热采集在进行试验之前，仪器一定要提前预热30min，达到工作温度后，按要求填写表头信息，完毕后点击采集

5、，使仪器处于采集状态后再进行试验。9.2样本预处理9.2.1血液标本3000r/min离心1min。9.2.2取富含血小板血浆（离心后上层清液的中部）。9.2.370℃加热时间严格控制在10min。9.2.4样本处理液加热冷却后，不要震荡、摇晃以免将处理过的下层干扰物质悬浮上来。9.2.5取处理液的上清液。9.2.6加入主剂的200µl液体要全部转移至平底试管，转移过程中不能出现气泡。9.2.7平底试管要一次插到底，插入后不要再碰触。10．结果判断与分析检测值﹤10pg/ml,阴性。检测值介于10～20pg/ml之间，临床观察期，建议动态采血检测。

6、检测值﹥20pg/ml，阳性，建议再次采血以确诊。11．实验解释本实验结果仅对本标本负责，提供给临床参考，请结合其他诊断方法和临床表现做综合诊断。12.特殊标本处理对一般黄疸、溶血、乳糜血标本，稀释2-5倍后进行检测。稀释步骤为：取100µl血浆标本加入到前处理液中，经过70℃干热并冷却后，再取225µl上述经处理后的标本加入到另外的一支900µl前处理液中，即得稀释5倍的待测标本（如需其他稀释倍数则按相应的比例进行），然后取200µl加入到反应主剂，溶解后全部转移至平底试管中插入仪器进行检测，注意需在检测软件中“稀释倍数”一栏填上稀释倍数，仪器会

7、自动按照相应的稀释倍数计算结果。备注：对于严重的黄疸、溶血、乳糜血标本，应重新采血。13．干扰因素产生的假阳性的原因有：应用纤维膜进行血液透析患者、某些纱布或其他医疗物品中含有葡聚糖、某些品牌的静脉制剂（白蛋白、凝血因子、免疫球蛋白等）、使用含有热源物质的器具存放样本等。14．质量控制标本进行测定时应同时进行标准曲线的制作，目的是测定内毒素的测试性能及验证检测结果的准确性能。（标准曲线的制作见标准曲线制作规范操作文件）15．维护保养15.1仪器保养注意防尘、防水、防污染、防止异物进入试管孔内；定期做好系统的表面清洁。15.2软件维护本系统的计算机应

8、只供本系统使用，对外来的一切软件、数据文件在使用前一定要先查杀病毒，避免造成日常记录文件的损坏或丢失。15.3三个月使用检