环肽的合成方法论文

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1、环肽的合成方法论文多肽药物在治疗上的重要性，越来越引起广大药学工作者的重视。根据肽链的构成可将多肽分为同聚肽（Homomeric）和杂聚肽（Heteromeric）两大类，前者完全由氨基酸组成，后者是由氨基酸部分和非氨基酸部分组成的，如糖肽。根据肽键的结构又分为直链肽和环肽。其中直链肽的研究最为广泛和深入，尤其在直链肽的合成技术方面无论是液相法还是固相法都已成熟。虽然许多直链肽体外具有很好的生物活性和稳定性，但是进入体内后活性很快消失。因为体内环境复杂，存在各种各样的酶。直链肽在酶的作用下很快降解.fr

2、eele126Cyclo(b-Ala-Phe-Pro)的合成中应用了对硝基酚酯法。Boc-b-Ala-Phe-Pro-OH在乙酸乙酯中与1.5摩尔量对硝基酚混合，DCC为缩合剂，得到Boc-b-Ala-Phe-Pro-ONp，经TFA脱去Boc，以0.1MNaHCO3和0.1MNa2CO3为碱，二氧六环为溶剂，室温反应，得到收率为32的环三肽27。对硝基酚酯法的优点在于对硝基酚价廉易得，缺点是过量的对硝基酚不易完全除去，产物不易纯化，颜色发黄。1.1.2N-羟基琥珀酰亚胺酯法：该方法原理与对硝基酚法一致

3、，唯一不同点在于线性多肽的C端羧基在缩合剂EDC的存在下与N-羟基琥珀酰亚胺（HONSu）缩合，形成直链多肽的N-羟基琥珀酰亚胺酯。应用这种方法Toshihisa等在吡啶溶液中合成了cyclo（Pro-Val-Pro-Val）和cyclo（Pro-D-Val-Pro-D-Val），收率分别为15和12。二者为非对映异构体，前者具有植物生长抑制作用，后者却表现为植物生长促进作用28。1.1.3五氟苯酚酯法：这类活泼酯用于环肽的合成是近年才发展起来的。Joullie在合成天然环肽生物碱SanjoinineG

4、1和其C11位对映异构体时在环合步骤中就应用了五氟苯酚酯法。首先以D-丝氨酸为原料，经多步反应得到环合前体，用五氟苯酚活化羧基，N端苄氧羰基经氢解脱掉后，以4-吡咯烷吡啶为催化剂，在二氧六环中回流，最终得到两个互为异构体的混合物，收率分别为27和2229-30，环合步骤如下图：另外，海洋生物环肽PatellamineB以及对纤维蛋白酶和丝氨酸蛋白酶有强烈抑制作用的环肽CyclotheonamideA的环合步骤也是应用了五氟苯酯法，收率分别是20和5331。1.2迭氮法在多肽合成中迭氮法是另一种比较经典的

5、方法，这种方法的优点在于很少引起消旋反应，最早用于直链肽的合成，现在常常被用于环肽的合成32-34。具体方法是，把直链肽的甲酯，乙酯，苄酯，取代苄酯或其它更活泼的酯通过肼解的方式生成酰肼，溶于醋酸或盐酸-醋酸混合溶液，在-5°C左右的温度下加入1M的亚硝酸钠溶液，产生的亚硝酸则与酰肼反应生成迭氮物。N端游离的直链肽迭氮物于4°C搅拌一天再升温至室温，可得环肽。通式如Scheme4Scheme4.PeptideCyclizationviatheacylazide（X=ZorBoc，R=Me，Et，Bzl）

6、Bodansky最早应用迭氮法合成了cyclo(D-Ala-D-Ala-Val-D-Leu-Ile)，虽然上述环肽不具有其母体化合物malformin的生物活性，但合成它为应用迭氮法合成环肽开辟了前景35。应用迭氮法合成环肽的另一个成功的例子是内皮素拮抗剂的合成。Endothelin(ET)是一种高效的血管收缩剂，由21个氨基酸残基组成36，其受体拮抗剂之一cyclo(D-Trp-D-Asp(OtBu)Fmoc-Ser-D-Val-Leu)的合成过程37如下：DPPA系二苯基磷酰基迭氮化物，是一种稳定的

7、液体，沸点157°C，用二苯基磷酰氯和NaN3在丙酮中室温反应很方便地得到，可以直接用作多肽偶联的缩合剂38，近年来多用于环肽的合成39-41。Arg-Gly-Asp（RGD）是多种细胞外蛋白与整合素相互作用时被整合素识别的关键序列，对含有该序列环肽的合成报道很多42-45。Kessler等用固相合成仪SP650合成了13个含RGD序列的线性六肽和七个含RGD序列的线性五肽，N端和C端均游离的直链肽在稀溶液中以DPPA为缩合剂，保持pH8.5~9，反应4天，得到相应的环六肽和环五肽，收率在15~50之间

8、。生物活性实验表明所有的环六肽对细胞粘附的抑制作用均明显低于线性肽GRGDS。环五肽中也只有Cyclo(RGDdFV)和Cyclo(RGDFd-V)对LamininP1的细胞粘附具有明显的抑制作用46-48。对于某些在碱性条件下易分解的目的物，反应过程当中应用惰性气体进行保护，例如，线性多肽H-Asp(Fmoc)-d-Ser-Phe-D-Phe-Arg-Gly-OH在无水DMF中，加入5倍量NaHCO3和10倍量DPPA，反应66小时，得到