sct1002-1992 草鱼出血病组织浆灭活疫苗检测方法

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1、中华人民共和国行业标准SC1002一92草鱼出血病组织浆灭活疫苗检测方法主题内容与适用范围本标准规定了草鱼出血病组织浆灭活疫苗制品的取样和试验方法，以及判定原则等。本标准适用于草鱼出血病组织浆灭活疫苗的检测，不适用于检测其他鱼用菌(疫)苗。2引用标准SC1001草鱼出血病组织浆灭活疫苗NY7成品检验的有关规定3取样3.1每批制品随机取样作为待检样品。取样量:制品在50瓶以下者，取2-4瓶;制品在50^10。瓶者，取样5瓶;制品在100瓶以上者，取样10瓶。3.2在无菌条件下，将每批待检样品混匀，并分装到灭菌小瓶中，数量

2、根据检测项目和要求而定，置于4C冰箱中待检。4pH检验采用经计量部门检定的市售pH比色计或精密试纸进行测试。pH值为5.5-7.。者为合格品。如pH小于5.5或大于7。，则为不合格品。5无菌检验在无菌条件下，用生理盐水将待检疫苗稀释10倍，从每管吸取。.2mL的量分别接种到普通肉汤、厌气肉肝汤和琼脂斜面上各一管，在37℃条件下培养96h，均应无菌生长。如有菌体生长，则为不合格口/口口。6安全性检验6.1试验容器6.，.1选用容积为1---2m'的水泥池或水簇箱等容器。容器需配有控温和通气增氧装置。6.1.2容器在使用前

3、用100ppm漂白粉水溶液消毒24h，消毒后用自来水冲洗干净，并放人适量经活性碳处理的自来水曝气24h后待用。6.2试验鱼种6.2.1应选用全长为8^15cm体质健壮，游动活泼，无任何损伤和疾病的当年草鱼种，并在试验前用2%的食盐水浸浴5^10min,6.2.2将符合6.2.1条的鱼种放人符合6.1条规定的容器中，于28^-30℃水温下饲养，观察15d.所有鱼均应活动正常。如发现有鱼种出现有出血病症状，则该批鱼种不得使用。6.3安全性试验中华人民共和国农业部1992一11一06批准1993一04一01VASc1002一

4、92用无菌生理盐水将待检疫苗样品稀释10倍。取符合6.2条规定的鱼种10尾，将稀释后的疫苗用无菌注射器对鱼种作腹腔或背肌注射，注射剂量为0.3^-0.5mL/尾。注射后的鱼种放入试验容器内，25-28℃水体中饲养，观察15d，如发现有鱼患出血病，则该批疫苗为不合格。7效力检验7.1鱼种免疫7.1.1按6.1条规定准备试验容器，按6.2条规定选择试验鱼种。7.1.2将经安全试验的待检样品用无菌生理盐水稀释10倍，用无菌注射器对鱼种进行注射免疫，每尾注射剂量为。.3^-0.5mL，试验鱼种不少于25尾。注射后的鱼种在25-

5、28℃的水温下饲养15^30d,该鱼种即为免疫鱼种。了.2免疫保护率的测定了.2，免疫鱼攻毒7.2.1.1病毒液的制备:按sc1001附录A的规定制备未经灭活的活毒悬液(活毒悬液的毒力测定见附录A),7.2.12攻毒试验:用生理盐水将活毒悬液稀释成毒力强度为100LDsu/0.5mL后，以0.3-0.5mL/尾的剂量，分别注射经免疫的试验组鱼种和未经免疫的对照组鱼种各20尾。攻毒后的鱼种在25-28'C的水体中观察15d，记录各组的死亡鱼数，计算死亡率。7.2.2免疫保护率的计算根据7.2.1.2条的试验结果，按下式计

6、算:对照组鱼种死亡率一试验组鱼种死亡率免疫保护率(%)=X100对照组鱼种死亡率判定:免疫保护率在80%以上的制品为合格品。8物理性状检验制品的感观性状应符合sc1001的规定。凡含有异物、摇不散的凝块、霉团及变质有异味者，均应剔出。同时应检验装量是否准确，封口是否严密，瓶签有无差错不清等。出厂检验应逐瓶进行。9有效期检验按标签上注明的保存方法进行保存，在保存期内应定期进行pH值、无菌性、安全性、效力和物理性状的检验。如发现制品质量发生明显改变，则应重新确定制品的有效期。10样品保存按NY7的规定执行。11检验报告每批

7、制品的检验经过和结果，应详细记载在记录本上，填写检验报告单(见附录B),检验人员签字或盖章。SC1002一92附录A活毒悬液毒力的测定(补充件)活毒悬液毒力的测定方法采用动物半数致死剂量(LDso)法。A1试验容器与试验鱼种的准备按6.1条与6.2条规定准备试验容器和选择试验鱼种。A2鱼种攻毒A2.，将待测毒力的活毒悬液用生理盐水作10倍连续梯度稀释成6个梯度(1。一’,10-',""",10-')aA2.2用灭菌注射器对鱼种进行腹腔或背肌注射活毒悬液，每一梯度注射10尾鱼种，并分别饲养于各试验容器中。注射剂量为每尾。

8、3-0.5mL。同时设只注射生理盐水的10尾鱼种作对照。所有的鱼均在25^28℃水体中饲养15d。记录各容器中鱼种的死亡尾数，计算各梯度活毒悬液的鱼种累计死亡率。A3攻毒鱼种半数致死量计算A3.1半数致死量:能使半数攻毒鱼种死亡的活毒悬液的稀释度，作为病毒致病能力判定的终点，通常以能使半数攻毒鱼种死亡的活毒悬液稀释度倒数的对数表示