snt 2870-2011 中肠腺坏死杆状病毒病（bmnv）检疫技术规范

《snt 2870-2011 中肠腺坏死杆状病毒病（bmnv）检疫技术规范》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖／犜２８７０—２０１１中肠腺坏死杆状病毒病检疫技术规范犙狌犪狉犪狀狋犻狀犲狆狉狅狋狅犮狅犾犳狅狉犫犪犮狌犾狅狏犻狉犪犾犿犻犱犵狌狋犵犾犪狀犱狀犲犮狉狅狊犻狊２０１１０５３１发布２０１１１２０１实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局犛犖／犜２８７０—２０１１前言本标准按照ＧＢ／Ｔ１．１—２００９给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国深圳出入境检验检疫局。本标准主要起草人：刘渤、陈莉莉、宗卉、罗卫、江育林。Ⅰ犛犖／犜２８７０—２０１１

2、中肠腺坏死杆状病毒病检疫技术规范１范围本标准规定中肠腺坏死杆状病毒病（ｂａｃｕｌｏｖｉｒａｌｍｉｄｇｕｔｇｌａｎｄｎｅｃｒｏｓｉｓ，ＢＭＮ）的检测方法，是用临床症状作为初步诊断，压片和组织病理切片作为确诊的检疫方法。本标准适用于中肠腺坏死杆状病毒病的诊断和鉴定，适用于本病的流行病学调查、检疫和监测。２规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。ＧＢ／Ｔ６６８２分析实验室用水规格和试验方法３设备、材料及试剂本标准所用

3、试剂除特殊规定外均为分析纯，试验用水应符合ＧＢ／Ｔ６６８２要求。３．１石蜡组织切片机。３．２组织脱水机（使用手工脱水的缸）。３．３石蜡包埋机。３．４切片染色机（使用手工染色所需的缸）。３．５展片所用水浴锅。３．６烘片机。３．７正置显微镜。３．８载玻片、盖玻片等常规组织切片用具。３．９Ｄａｖｉｄｓｏｎ’ｓ固定液（见Ａ．１）。３．１０石蜡（熔点５２℃～５４℃或５０℃～５２℃）：切片级。３．１１乙醇：包括无水乙醇、９５％乙醇、８５％乙醇、８０％乙醇、７５％乙醇、５０％乙醇。３．１２二甲苯。３．１３盐酸。３．１４氢氧化钠。３．１５苏木素染色液（见

4、Ａ．２）。３．１６伊红染色液（见Ａ．３）。３．１７黏片剂（见Ａ．４）。４诊断方法４．１犅犕犖犞的初步诊断方法对于监测和检测ＢＭＮＶ，最好取幼体和早期的仔虾。临床症状：幼体和仔虾患病后，首先可以看到白浊的中肠腺。随着疾病的发展，白浊化越来越明显，１犛犖／犜２８７０—２０１１越来越容易辨认。参见图Ｂ．１４．２犅犕犖犞的确诊方法４．２．１压片法用新鲜对虾的中肠腺压片或涂片染色后在暗视野下检查能快速诊断ＢＭＮ病毒感染。将组织置于载玻片上，用解剖刀将样品切碎，盖上盖玻片，在暗视野下观察。４．２．２组织病理学技术４．２．２．１组织固定４．２．２．１．

5、１用Ｄａｖｉｄｓｏｎ’ｓＡＦＡ固定液固定欲检查的虾，准备足够的固定液，固定液体积应是欲固定的组织块总体积的１０倍～１５倍。推荐用Ｄａｖｉｄｓｏｎ’ｓＡＦＡ固定液，该固定液可迅速固定并减轻对虾的自溶变化，而且其中含的酸性成分可以除去表皮的石灰质。４．２．２．１．２对虾幼体或仔虾，用细网筛或者吸管把所选的幼体或仔虾直接放入固定液。固定１２ｈ～２４ｈ，然后转入５０％～７０％的乙醇中保存。４．２．２．１．３稍大的仔虾和很小的稚虾：用针或尖头镊子切去体表虾壳，把虾直接浸泡在固定液中，固定１２ｈ～２４ｈ，然后转入５０％～７０％的乙醇中保存。４．２．２

6、．１．４更大的仔虾、稚虾和成虾，用注射器往虾头处注入固定液（用量为样品体积的５％～１０％。针头大小根据虾的大小决定，例如对仔虾和小稚虾可用２７号针头）。首先注射中肠腺，要注射２个或多个位点，注射的量要足以使中肠腺变白或橘黄色；然后取出中肠腺浸泡在固定液中，固定１２ｈ～２４ｈ，然后转入５０％～７０％的乙醇中保存。４．２．２．２组织学标本的修整取材４．２．２．２．１从５０％或７０％的乙醇保存液中取出固定好的标本，置于木头或塑料垫板上，根据标本的大小进行修整，确保目标组织能被有效切片。４．２．２．２．２幼体和仔虾：用擦镜纸将个体包好，放于脱水盒

7、中进行脱水，包埋时去除擦镜纸，用热镊子调整标本在包埋器皿中的位置进行包埋。４．２．２．２．３小于３ｃｍ的幼虾：用单面刀片或解剖刀沿幼虾的中线右侧将标本纵剖两半。取包含中线的左侧进行脱水，包埋时纵切面向下包埋。４．２．２．２．４大于３ｃｍ的幼虾或亚成年虾：用单面刀片或解剖刀从对虾的头胸和腹节连接处切断，再将头胸沿中线右侧纵剖两半。取包含中线的左侧，切去步足８０％的长度，剔除胃内容物；如果头胸长度大于１ｃｍ，切取包含胃部和肝胰腺部分的１ｃｍ以下的部分；如果厚度大于０．５ｃｍ，削去高出０．５ｃｍ的部分，再从不含中线的右侧头胸部斜切下鳃区，将切取

8、的含中线左侧头胸部和切下的鳃区放入同一个脱水盒中进行脱水，包埋时将含中线左侧头胸部的纵切面向下，鳃区的纵切面向上，前后对错放入同一个包埋器皿中包埋。４．２．２．２．５大于８ｃｍ的虾，参照大于３