snt 2664-2010 蜂王浆中四环素类抗生素残留量测定方法 放射受体分析法

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1、中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖／犜２６６４—２０１０蜂王浆中四环素类抗生素残留量测定方法放射受体分析法犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳狋犲狋狉犪犮狔犮犾犻狀犲狊狉犲狊犻犱狌犲狊犻狀狉狅狔犪犾犼犲犾犾狔犳狅狉犻犿狆狅狉狋犪狀犱犲狓狆狅狉狋—犚犪犱犻狅狉犲犮犲狆狋狅狉犪狊狊犪狔犿犲狋犺狅犱２０１０１１０１发布２０１１０５０１实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局犛犖／犜２６６４—２０１０前言本标准按照ＧＢ／Ｔ１．１—２００９给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人

2、民共和国浙江出入境检验检疫局。本标准主要起草人：张晓峰、陈笑梅、朱振江、施伟良、方莹。Ⅰ犛犖／犜２６６４—２０１０蜂王浆中四环素类抗生素残留量测定方法放射受体分析法１范围本标准规定了蜂王浆中四环素类抗生素残留的放射受体分析（ＣｈａｒｍⅡ）方法。本标准适用于蜂王浆中四环素、金霉素、土霉素、强力霉素抗生素残留总量的测定。２规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。ＧＢ／Ｔ６６８２分析实验室用水规格和试验方法

3、３方法提要放射受体分析（ＣｈａｒｍⅡ）方法的基础是药物功能团与微生物受体位点的结合反应，这些位点与某一类种抗生素的共有功能团相关。应用受体的这种特异性可以实现对某一类抗生素的多残留分析。本方法中，样品中残留的四环素类药物经提取、稀释后与［３Ｈ］标记的金霉素共同竞争结合特异的受体位点。在一定温度下反应后，离心分离，清除未结合的四环素类药物，最后加入闪烁液，测定［３Ｈ］衰变发出的β粒子放射性量值，计数ｃｐｍ（ｃｏｕｎｔｐｅｒｍｉｎｕｔｅ）。测得的ｃｐｍ值与样品中四环素类抗生素残留量成反比。４试剂和材料除另有说明外，所用试剂均为分析纯

4、，水为ＧＢ／Ｔ６６８２规定的一级水。１）：４．１四环素类检测试剂盒４．１．１组织阴性对照浓缩干粉：组织阴性对照浓缩干粉储存于２℃～６℃。４．１．２ＭＳＵ多抗标准品浓缩干粉：浓缩干粉储存于２℃～６℃。４．１．３组织萃取缓冲溶液（ＭＳＵ萃取缓冲溶液）干粉：储存于２℃～６℃。４．１．４Ｍ２缓冲溶液干粉：用于调节ｐＨ值，储存于２℃～６℃。４．１．５四环素类受体药片：白色，－１５℃以下的条件保存。４．１．６四环素类氚标记药片：橙色，－１５℃以下的条件保存。４．２组织阴性对照溶液：使用时取组织阴性对照浓缩干粉（４．１．１）按试剂盒说明书配制

5、成阴性对照溶液。配制好的溶液可在２℃～６℃冰箱或冰浴中保存４８ｈ。如长时间不用，可将溶液保存于－１５℃以下的冰箱中，使用时将其解冻。再解冻的溶液在２℃～６℃冰箱中可保存２４ｈ。４．３ＭＳＵ多抗标准溶液：使用时取浓缩干粉（４．１．２）按试剂盒说明书配制成多抗生素标准溶液。溶液的保存方法同４．２。１）给出该信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对某一产品的认可。如果其他产品具有相同的效果，需经实验评估后使用这些等效产品。１犛犖／犜２６６４—２０１０４．４组织萃取缓冲溶液（ＭＳＵ萃取缓冲溶液）：使用时取浓缩干粉（４．１．３）按试剂盒说

6、明书配制成组织萃取缓冲液。可在２℃～６℃下保存２个月。４．５Ｍ２缓冲溶液：使用时取浓缩干粉（４．１．４）按试剂盒说明书配制成组织萃取缓冲液。可在２℃～６℃下保存２个月。Ｒ闪烁液。４．６Ｏｐｔｉｆｌｕｏｒ４．７阴性对照液：取２ｍＬ组织阴性对照溶液（４．２），加至６ｍＬ组织萃取缓冲溶液（４．４）中制成阴性对照液，在室温下混匀，该对照液可在室温下保持６ｈ以上。此溶液用于分析仪器和试剂的性能监测。４．８阳性对照液：取０．３ｍＬ多抗标准溶液（４．３），加至１５ｍＬ组织阴性对照溶液中（５．２），混匀；然后从中取０．３ｍＬ混合溶液加入到６ｍＬ

7、ＭＳＵ萃取缓冲溶液（４．４）中制成阳性对照液（金霉素浓度４ｎｇ／ｍＬ）；在室温下混合均匀。该对照液可在室温下保持６ｈ以上。此溶液用于分析仪器和试剂的性能监测。４．９５０％甲醇水溶液（１＋１，体积比）：１００ｍＬ甲醇溶解于１００ｍＬ水。４．１０氢氧化钠溶液（１ｍｏｌ／Ｌ）：４０ｇ氢氧化钠溶解于１０００ｍＬ水。４．１１ｐＨ试纸：范围５～１０。４．１２空白基样：选取确认不含有四环素族抗生素的蜂王浆，作为空白基样，用于测定当次批次试剂盒的控制点使用。５仪器５．１ＣｈａｒｍⅡ７６００分析仪或相当者。５．２孵育器。５．３离心机。５．４均质器

8、。５．５移液器：１０μＬ～１００μＬ，１００μＬ～１０００μＬ和２ｍＬ～１０ｍＬ。５．６涡旋混合器。５．７电子天平：０．０１ｇ～１００ｇ。６试样的制备与保存６．１试样的制备原始样品总量不得少于５００ｇ，采用四分法，将样品分成两等份装入洁净容器，加封并做标识。６．