snt 2475-2010 植物类病毒脱除处理规程

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1、中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖／犜２４７５—２０１０植物类病毒脱除处理规程犚狌犾犲狊狅犳狆犾犪狀狋狏犻狉狅犻犱狊犲犾犻犿犻狀犪狋犻狅狀２０１００１１０发布２０１００７１６实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局中华人民共和国出入境检验检疫行业标准植物类病毒脱除处理规程ＳＮ／Ｔ２４７５—２０１０中国标准出版社出版北京复兴门外三里河北街１６号邮政编码：１０００４５网址ｗｗｗ．ｓｐｃ．ｎｅｔ．ｃｎ电话：６８５２３９４６６８５１７５４８中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷开本８８０×１２３０１／１６印张０．５字数８千字２０１０年４月第一

2、版２０１０年４月第一次印刷印数１—１６００书号：１５５０６６·２２０７０８定价１４．００元犛犖／犜２４７５—２０１０前言本标准的附录Ａ为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院。本标准主要起草人：李桂芬、王仁睿、马洁、李明福、张永江、魏梅生。本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。Ⅰ犛犖／犜２４７５—２０１０植物类病毒脱除处理规程１范围本标准规定了植物类病毒脱除处理方法。本标准适用于检验检疫行业、农业、林业对带有类病毒的植物繁殖材料的脱除处理。２术语和定义下列术语和定义适用于本标准。２．１

3、类病毒脱除处理狏犻狉狅犻犱犲犾犻犿犻狀犪狋犻狅狀通过有效的方法，脱去植物带有的类病毒的过程。２．２组织培养狆犾犪狀狋狋犻狊狊狌犲犮狌犾狋狌狉犲在无菌条件下，将离体的植物器官、组织、细胞以及原生质体等繁殖材料，培养在人工培养基上，并在人工控制的环境中生长、分化、增殖至再生植株的过程。２．３茎尖培养狊犺狅狅狋犪狆犻犮犲狊犮狌犾狋狌狉犲在无菌条件下剥取植物茎尖（顶端分生组织带１个～２个幼叶原基），在人工控制的条件下分化再生的方法。２．４低温处理犾狅狑狋犲犿狆犲狉犪狋狌狉犲狋犺犲狉犪狆狔将植物或植物组织置于低温环境下（２℃～７℃），黑暗或光照条件下持续处理６

4、个月以上来抑制类病毒增殖的方法。２．５无类病毒苗狏犻狉狅犻犱犳狉犲犲狊犲犲犱犾犻狀犵狊经过类病毒脱除处理过程和检测结果为阴性的再生种苗。３原理３．１处理原则针对检验检疫或生产中发现植物携带管制的类病毒，一般可进行销毁处理。如因植物珍贵或应客户需求，需针对管制的类病毒实施脱除处理。３．２植物类病毒脱除处理针对植物类病毒在植物体内分布不均匀、低温能够抑制类病毒增殖的特性，设计在低温条件下对植物进行处理加上茎尖分生组织培养，以脱去植物类病毒。４仪器和用具４．１仪器４．１．１超净工作台。４．１．２天平（０．００１ｇ）。１犛犖／犜２４７５—２０１０４．１．３

5、解剖镜。４．１．４光照培养箱。４．１．５高压灭菌锅。４．１．６ｐＨ计或ｐＨ试纸。４．１．７ＰＣＲ仪。４．１．８分子杂交箱。４．１．９电泳槽。４．２用具４．２．１量筒。４．２．２容量瓶。４．２．３接种针。４．２．４镊子。５类病毒检测方法５．１生物学检测（指示植物法）。５．２往返聚丙烯酰胺凝胶电泳ｒｅｔｕｒｎＰＡＧＥ。５．３ＲＴＰＣＲ方法。５．４核酸杂交方法。６类病毒脱除处理程序６．１植株的低温处理www.bzfxw.com将植株放在２℃～７℃条件下，在光照或黑暗条件下连续处理６个月以上。６．２材料剪取与灭菌剪取经过低温处理的植株茎尖１ｃｍ～２ｃｍ，

6、自来水冲洗３０ｍｉｎ，剥去外面的叶片。将茎尖置于超净工作台上，无菌条件下进行消毒：７５％的乙醇浸泡１０ｓ，已灭菌的蒸馏水冲洗３次～５次；再用０．１％的升汞浸泡材料，滴入１滴～２滴吐温，消毒时间５ｍｉｎ～１５ｍｉｎ，用灭菌的蒸馏水冲洗３次～５次，每次５ｍｉｎ。将处理过的材料放入灭菌的培养皿中待用。６．３茎尖剥离与接种将经过上一步处理过的茎尖放在解剖镜下，用已灭菌的解剖刀逐层剥去幼叶，直至出现顶端分生组织，将顶端分生组织和毗邻的１个～２个幼叶原基切下，直立向上接种到适宜的固体培养基上。参见附录Ａ。６．４试管苗类病毒检测用上述类病毒的检测方法检测试管苗，如

7、果检测结果为阴性则初步定为脱类病毒试管苗，进行后期的扩繁和生根移栽，如果检测结果为阳性则不是脱类病毒试管苗，需要再进一步进行类病毒脱除处理。６．５试管苗的扩繁与生根培养６．５．１试管苗的扩繁检测结果为阴性的试管苗可接种到扩繁培养基上进行增殖。６．５．２生根培养试管苗长至３ｃｍ～５ｃｍ时转至生根培养基进行培养。６．６试管苗的驯化将生长茁壮、有３片～５片叶的试管苗移至温室进行炼苗。２犛犖／犜２４７５—２０１０６．７移栽６．７．１过渡培养取出试管苗，洗净根部培养基，移入适宜的栽培基质中，刚移栽后的试管苗要避光，湿度：８５％，温度：白天２５℃～２８℃，夜间１

8、５℃～１８℃。避光保湿培养２ｄ～３ｄ后在正常的光照、温湿度条件下进行培养。６．７．２移入土壤过渡培养２周后，