谈竹荪提取液对砷中毒小鼠免疫功能的保护作用

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1、谈竹荪提取液对砷中毒小鼠免疫功能的保护作用地方性砷中毒是一种严重威胁人类健康的疾病，可以引起神经、泌尿、消化、心血管、免疫、内分泌等多系统、多器官的损伤，甚至可以引起肿瘤的发生[1，2]。竹荪是一种食、药两用真菌，有学者观察到竹荪托盖液对辐射损伤大鼠免疫系统有一定的修复作用[3]，但对砷引起的免疫损伤是否具有保护作用却未见报道。在既往竹荪提取液抗突变和抗氧化损伤研究的基础上[4，5]，本实验进一步研究竹荪提取液对急性砷中毒小鼠免疫系统的损伤是否具有保护作用，为地方性砷中毒的防治提供依据。　　1材料与方法　　1.1主要仪器　　酶标仪MQX200（美国BiO-TEK公司）、CO2培养箱（

2、日本三洋公司）、TGLL-18台式高速离心机（北京长源实验设备厂）、HH-8恒温水浴箱（上海申化仪表自控公司）。　　1.2主要试剂　　As2O3(AR)由公共卫生学院中心实验室提供，溶血素由浙江省玉环县南方试剂厂生产，小牛血清由杭州四季青有限公司生产，细胞培养液RPMI1640由Hyclome公司生产。　　1.3竹荪提取液竹荪干品由贵州省野生资源开发保护研究中心生产。准确称取竹荪干品50g加500ml双蒸水浸泡3h，制成匀浆，煮沸30min后用200目滤筛过滤，将滤液浓缩至200ml，所得竹荪提取液浓度为0.25g/ml，4℃冰箱保存备用。　　1．4动物及分组健康昆明种小鼠180只，

3、雌雄各半，体重28～32g，由贵阳医学院实验动物中心提供。平均分为3批，每批60只，每批随机分为6组，每组10只；每批分组及剂量均相同。正常对照组，竹荪高剂量、低剂量组（10g/kg、5g/kg），砷中毒模型组(As2O35mg/kg)，竹荪治疗高剂量和低剂量组（竹荪10g/kg、5g/kg）。砷中毒模型组和竹荪治疗组用As2O3按5mg/kg标准造模，1次/d，连续7d；竹荪治疗组在造模的每天下午给竹荪治疗，灌胃量0.02ml/g。　　1.5实验相关试剂的配制　　1.5.1绵羊红细胞悬液(SRBC)　　健康成年绵羊颈静脉处局部消毒采血，加入等体积阿氏细胞保存液(Alsever's)

4、，4℃保存。临用前用巴比妥缓冲液洗涤3次，2000r/min离心5min，弃上清液。　　1.5.2巴比妥缓冲液（BBS）　　准确称取NaCl85g、巴比妥5.75g、巴比妥钠3.75g、MgCl21.017g、无水CaCl220.066g，将巴比妥钠溶于双蒸馏水中，依次溶解上述试剂，双蒸馏水定容至1000ml，高压蒸气灭菌20min，4℃冰箱中保存。　　1.5.3营养肉汤及6%淀粉肉汤配制　　牛肉浸膏0.3g、蛋白胨1.0g、NaCl0.5g，加入100ml双蒸馏水中，微火加热溶解，高压蒸汽灭菌20min，4℃冰箱中保存。在营养肉汤中加入可溶性淀粉6g。　　1.6观察指标　　实验结束

5、时准确称量实验小鼠体重，颈椎脱臼法处死小鼠，取肝脏、肾脏、脾脏并称重，计算脏器指数。用分光光度比色法检测CH50活性，四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测T淋巴细胞的增殖功能，显微计数法检测并计算巨噬细胞吞噬百分率和吞噬指数。　　1.7统计方法　　采用SPSS10.0统计软件进行分析，实验结果用（x±s）表示，采用方差分析及t检验。　　2结果　　2.1小鼠体重和脏器指数各组小鼠的体重、肝脏、脾脏和肾脏指数均无显著性差异。见表1。表1各组上鼠小鼠体重及脏器指数比较（略）注：脏器指数=[脏器重量(g)/小鼠体重(g)]100%。　　2.2CH50淋巴细胞增殖、吞噬率及吞噬指数

6、　　　　由表2可见，与正常对照组相比，砷中毒组CH50显著降低，差异具有显著性（t=3.345,P=0.032<0.05）；竹荪5g、10g组CH50与正常组比较差异无显著性。与砷中毒组相比，竹荪治疗5g组CH50有升高趋势，但无显著性差异；竹荪治疗10g组CH50显著升高，差异具有显著性（F=4.923,P<0.01）。与正常对照组相比，砷中毒组淋巴细胞增殖功能显著降低，差异有显著性（t=2.150，P<0.05）；竹荪5g、10g组淋巴细胞增殖功能与正常对照组比较差异无显著性。竹荪治疗5g组淋巴细胞增殖功能与砷中毒组相比，差异无显著性；竹荪治疗10g组淋巴细胞增

7、殖功能与砷中毒组比较明显升高，差异具有显著性（F=2.703，P<0.05）。与正常对照组相比，砷中毒组吞噬率显著降低，差异有显著性（t=3.170，P≦0.05）；吞噬指数显著降低，差异有显著性（t=4.009，P=0.01）。竹荪5g、10g组吞噬率和吞噬指数与正常对照组比较差异无显著性。与砷中毒组相比，竹荪治疗5g组和竹荪治疗10g组吞噬率明显升高，差异有显著性（F=23.005，P<0.01，P≤0.01）；吞噬指数明显升高，差异