snt 1450-2004 咖啡美洲叶斑病菌鉴定方法

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1、中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T1450-2004咖啡美洲叶斑病菌鉴定方法MethodsforidentificationofMycenacitricolor(Berk.&Curt.)Sacc2004-06-01发布2004-12-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局SN/T1450-2004前言本标准的附录A和附录B为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位:中华人民共和国广州出人境检验检疫局。本标准主要起草人:钟国强、张传飞、司徒保禄、赵立荣。本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。SN/T1450-2004咖啡美洲叶斑病菌鉴定方

2、法范围本标准规定了咖啡美洲叶斑病菌的鉴定方法。本标准适用于来源于咖啡美洲叶斑病疫区(参见附录A)的咖啡和其他主要寄主植物苗木(参见附录B)携带的咖啡美洲叶斑病菌的鉴定。术语和定义下列术语和定义适用于本标准口2.1芽抱gemmae咖啡美洲叶斑病菌的无性繁殖体，一种黄色的针状结构，由茎和飞碟状芽抱体组成，是该病的主要传播繁殖结构。2.2担子果basidiocarp咖啡美洲叶斑病菌的有性生殖体，一种黄色的伞状小菇。3原理3.1咖啡美洲叶斑病菌的分类地位咖啡美洲叶斑病菌「Mycenacitricolor(Berk.乙Curt.)Sacc]，属担子菌亚门(Basidiomycotina),层菌纲(Hym

3、enomycetes)、伞菌目(Agaricales)、伞菌科(Agaricaceae)、小菇属(Mycena),咖啡美洲叶斑病现局限发生在美洲的一些国家和地区，主要为害咖啡属植物的叶片、嫩枝和嫩果，气候条件与环境条件适合时，也可为害其他科属植物。病害英文名:AmericanLeafSpotofCoffee.3.2检疫原理咖啡美洲叶斑病菌为美洲热带潮湿山区和森林地区的一种弱寄生菌，通常腐生于腐朽的树干或腐殖质中，在适宜的气候和环境下，病原菌的菌丝体可以寄生咖啡和其他寄主植物组织，使寄主发病，产生坏死病斑。病原菌产生两种繁殖结构:无性生殖的芽抱和有性生殖的担子果(担子果的产生通常需要用青霉菌诱发

4、)。通过检疫来自该病发生地区的寄主苗木，分离纯化病原菌，利用该病的症状特征和病原特征进行鉴定。3.3鉴定原理咖啡美洲叶斑病的症状、病原菌形态特征和生物学特性(培养性状和生物荧光的产生)是该病鉴定的主要依据。4仪器和试剂4.1生物显微镜4.2体视显微镜4.3高压灭菌器。4.4超净工作台。4.5生物培养箱。4.6塑料盒(28cmX22cm)SN/T1450-20044.75%次氯酸钠(NaCIO)溶液。4.8马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基。5检验方法5.1组织保湿法用塑料盒作为培养器皿，在盒内铺上保湿滤纸，将采集的病叶组织样品置于滤纸上，喷雾保持病叶高度湿润，置25℃培养箱内在自然光或弱光下培养

5、，3d后取出叶片观察病斑上有无针状、黄色的芽抱产生，如发现芽抱，将芽抱移至PDA培养基内继续培养，观察菌落形态、颜色、芽抱以及担子果的产生情况。5.2培养基法剪取可疑的病斑组织，用5%次氯酸钠溶液消毒5min，灭菌水洗三至四次，将病斑组织移到PDA的培养基中，置250C培养，3d后观察菌落的形态、颜色、芽抱以及担子果的产生情况。5.3生物荧光观察方法将病叶或培养菌落，带进黑暗的房间中，停留15min以适应黑暗的环境，肉眼观察病叶上病斑或培养的菌落是否可以产生生物荧光。5.4担子果诱发试验取分离纯化的咖啡美洲叶斑病菌可疑待测菌和青霉菌Penicilliumspp.的菌落，分别接种于同皿PDA培养

6、基的一侧培养，培养3d后该菌与青霉菌菌落交界处拮抗带的边沿可产生大量芽抱及黄色、伞状的担子果。55致病性试验按5.1组织保湿法在盒内平铺三层保湿滤纸，取分离纯化得到的芽抱或菌丝(注:不能用担子果)接种在冲洗干净的健康咖啡或其他寄主叶片上，每天喷雾保湿，观察症状和病原的产生情况。6鉴定特征氏1症状特征已1.1病叶上病斑大小为3mm^-10mm，多数为4mm^-6mm，典型的病斑为圆形，黄褐色至浅红褐色，病部正面稍凹陷，病斑中央往往残留着芽抱人侵叶片时留下稻杆颜色的芽抱体。病健交界明显，形状如鸡眼(又叫鸡眼病)。当两个以上病斑连接时，病斑形状不规则形。干旱季节，病部的坏死组织会脱落，流下空洞。叶脉

7、上的病斑向两边稍伸长，凹陷，浅灰色，病部有散生的乳黄色晕圈，晕圈外有狭窄的暗色边缘。6.1.2枝条上病斑症状为长椭圆形，黑褐色，中间浅灰，病部稍凹陷。受害果实产生近圆形斑点，后期病部变灰白色至浅红褐色。6.2病原特征6.2.1在显微镜下观察菌丝无色，有分隔，菌丝细胞双核并具典型的锁状联合体菌丝。在PDA培养基中，菌丝初呈白色，成放射状紧贴着培养基表面向四周扩展，气生菌丝少，培养3d后中央开始产生黄