snt 1140-2002 甜菜胞囊线虫检疫鉴定方法

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1、甜菜胞囊线虫检疫鉴定方法MethodsforquarantineandidentificationofHeteroderaschachtiiSchmidtSN／T1140一2002前言本标准的附录B、附录C、附录D和附录E为规范性附录，附录A为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国上海出入境检验检疫局、南京农业大学。本标准主要起草人：戚龙君、宋绍祚、林茂松。本标准系首次发布的检验检疫行业标准。1范围本标准规定了对甜菜胞囊线虫检疫和鉴定方法。本标准适用于甜菜及其他藜科和十字花科等植物及植物繁殖材料的根和病土中甜菜胞囊线虫的检疫和鉴定。2原

2、理甜菜胞囊线虫Sugarbeetcystnematode，学名：HeteroderaschachtiiSchmidt，1871，属于线虫门(Nemata)、侧尾腺纲(Secernentea)、垫刃目(Tylenchida)、异皮科(Heteroderidae)、异皮线虫属(Heterodera)。该病原线虫一生中形态多样，由蠕虫状二龄幼虫进入寄主植物根内发育，变成豆荚状三龄幼虫，此时出现性别分化，三龄雌幼虫发育成近葫芦形四龄早幼虫，四龄雄虫为蠕虫状，四龄雌幼虫再蜕变为雌性成虫，白色的成熟雌虫与雄虫交配后，蠕虫状的雄虫便死亡，雌虫完全成熟后就叫胞囊，胞囊一般从根表面掉入土中。受害甜菜出现

3、侧根增多，整个根系呈簇须状，严重缺少功能根，在太阳照射下或干燥土壤中萎蔫。甜菜胞囊线虫是危害甜菜及其他藜科和十字花科植物(参见附录A)的一种植物寄生性线虫，该病原线虫主要靠寄主植物和病土的移动进行传播。它的侵染循环、传播途径、寄主范围、生物学和形态学特征是该检疫鉴定方法的依据。3仪器、用具3.1Fenwick胞囊漂浮器。3.2生物显微镜(100倍～1000倍，具有目镜测微尺或者绘图仪、监视器等)。3.3体视显微镜(10倍～90倍，具透射光源)。3.4加热板。3.5低速离心机(1000r／min～4000r／min)。3.6离心管(100mL)。3.7载玻片。3.8盖玻片。3.9分样筛(

4、直径均为20cm，孔径为20目、60目、100目、300目、500目)。3.10烧杯(500mL、1000mL)。3.11毛刷。3.12打孔器。3.13干燥器。3.14挑针。3.15冰箱。3.16滤纸。3.17酒精灯。3.18培养皿。3.19解剖刀。3.20搪瓷盘。3.21竹针。3.22试管。3.23记号笔。3.24指形管。3.25玻璃纤维丝(3mm～5mm)。4药品4.1中性树胶。4.2TAF固定液(40％甲醛7mL、三乙醇胺2mL和蒸馏水91mL混合而成)。4.3酒精(浓度为70％、95％和100％)。4.4双氧水(H2O2)(浓度为40％)。4.5丁香油。4.6蔗糖溶液(W／V为

5、80％)。4.7指甲油。4.8石蜡。4.9乳酚油(苯酚20mL、乳酸20mL、甘油40mL和蒸馏水20mL混合而成)。5现场检疫5.1抽样5.1.1抽样方法棋盘式、五点式或随机抽样。5.1.2抽样数量按总件数的5％～20％抽样，最低抽检数量不少于10件或500株。取样的数量为：50株以下取五株；51株～200株取10株；201株～1000株取15株；1001株～5000株取20株；5001株以上，每增加5000株增取五株，不足5000株的余量计取五株样品。5.2外观症状检查对植物，尤其是甜菜、藜科、十字花科及其他植物繁殖材料的带根和土的情况进行检查，注意检查侧根较多，整个根系呈簇须状，

6、植株出现萎蔫状的材料，收集上述材料和所扦取的样品及运输工具上可能携带的土壤，一并带回实验室检验。6实验窒检验6.1土壤的收集用毛刷将收集的材料和所扦取的样品的根或其他组织表面附着的土刷下，收集到塑料袋中，作为检验的土样。6.2线虫分离6.2.1改进的浮力离心法本法可以分离到土壤中的胞囊和幼虫，一般用于检验100g以下的土壤。具体分离步骤如下：标准分享网www.bzfxw.com免费下载6.2.1.1搓碎土样，充分混匀。6.2.1.2100mL离心管加水70mL，再加土样，搅拌成悬浮状。6.2.1.33000r／min离心5min，去上清液。6.2.1.4加入80％蔗糖液60mL，搅拌成

7、悬浮状。6.2.1.52000r／min离心2min。6.2.1.6上清液倒入套筛中(20目+100目+500目)，用清水尽快冲洗。6.2.1.7去除20目筛中的杂质；从100目筛中可以收集到胞囊(阴门锥制作方法见附录B)；将500目筛中剩余物全部洗入培养皿中，在体视显微镜下观察，用挑针挑取二龄幼虫制备临时玻片(线虫玻片制作见附录C)镜检。6.2.2套筛法本法可同时分离土壤中的胞囊和二龄幼虫，一般用于检验100g以下的土壤。具体方法如下：6.2