乳腺癌患者cox-2 mrna 表达及雌激素受体水平相关性探究

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1、乳腺癌患者COX-2mRNA表达及雌激素受体水平相关性探究【摘要】目的通过分析人乳腺癌COX-2mRNA表达与雌激素受体水平的相关性，以探讨COX-2在人乳腺癌发病机制中的作用。方法选择17例浸润性乳腺癌患者冰冻癌组织，采用定量RT-PCR方法癌组织中COX-2mRNA水平。用配体结合方法测定雌二醇受体(ER)及孕酮受体(PR)水平。结果COX-2mRNA表达与PR呈正相关(P<0．05)。结论人乳腺癌患者COX-2mRNA表达与PR水平呈正相关，PR和COX-2mRNA测定有助于选择治疗方案和判定预后。�【关键词】COX-2mRNA;雌激素受体；孕酮

2、受体；乳腺癌�乳腺癌患者的环氧化酶(COX)-2表达水平升高，且患者预后差[1-2]。研究证明，乳腺癌组织及癌旁组织中COX-2mRNA水平增高，并与血管内皮生长因子的增高水平(VEGF)呈正相关，表明COX-2在乳腺癌发病机制及肿瘤血管生成过程中起重要作用[3]。雌激素受体-雌二醇受体(ER)和孕酮受体(PR)是乳腺癌患者激素治疗的重要影响因素。本文旨在观察乳腺癌组织中COX-2表达与ER、PR水平的相关性，以探讨COX-2在乳腺癌发病机制及预后中的作用。� 71资料与方法�1．1材料选取本院2006年1月至2007年6月经病理检查证实为浸润性乳腺癌

3、患者的癌组织17例，年龄41~67(平均56．7)岁。所有病例术前均未行化疗、放疗及其他辅助治疗。立即经液氮冰冻后于-70℃储存备用。�1．2ER和PR水平测定采用改良的葡聚糖被覆活性炭测定ER和PR水平[4]。ER≥3fmol/mgpro为阳性表达，PR≥5fmol/mgpro为阳性表达。�1．3COX-2mRNA提取采用RNeasyMiniisolationkit(Qiagen公司,德国)提取细胞RNA，严格按说明书步骤操作。经DNase(Promega公司)处理后用RiboGreenreagent(美国英杰生命技术公司)进行RNA定量测定，严格按

4、说明书步骤操作。实验重复3次。�1．4COX-2的RT-PCR测定每份样品采用ABIPRISM7700SequenceDetector和TaqManEZRT-PCRCoreReagentsKit(Perkin-ElmerAppliedBiosystems，美国)进行RT-PCR定量测定，重复2次。如果测定结果不相近再重复1次。采用PrimerExpresssoftware(PE-Applied7Biosystems,Warrington,英国)设计寡核苷酸类引物。TaqMan探针标记引物序列为5-TTCCTACCACCAGCAACCCTGGCA-3，寡

5、核苷酸正义引物为5-GAATCATTCACCAGGCAAATTG-3和反义引物为5-TTTCTGTACTGCGGGTGGAAC-3。反转录反应条件50℃2min,60℃10min，92℃5min。聚合酶链反应条件为92℃20s，62℃25s，共50个循环。用系列稀释的单链正义寡聚核苷酸扩增子绘制标准曲线用于定量每μgRNA的mRNA拷贝数。�1．5统计学方法采用SAS6．11软件包进行Kruskal-Wallis检验。�2结果�2．1COX-2mRNA表达结果17例浸润性乳腺癌组织均检测到COX-2mRNA表达，拷贝数为15649~2033089(平均

6、131668)/μgRNA。见表1。�2．2ER和PR的表达结果ER表达阳性者1例，PR表达阳性者7例。见表1。�2．3COX-2mRNA拷贝数与ER、PR阳性表达的相关性COX-2mRNA拷贝数与PR表达阳性有相关性(P<0．05)。�3讨论�7环氧化酶(COX)是前列腺素合成过程中的重要限速酶，可将花生四烯酸代谢成各种前列腺素产物，从而维持机体的各种生理和病理过程。环氧化酶至少有2种形式:COX-1和COX-2。COX-2静息时并不表达，但在细胞因子、生长因子、癌基因等刺激因子的作用下可被诱导表达，参与炎症反应、细胞增殖及分化过程。近年来许多证据表

7、明，COX-2与肿瘤的发生发展有关。Liu等[5]在转基因小鼠模型中发现COX-2的过度表达可以诱导乳腺癌的发生。Sivula等[6]研究发现浸润性乳腺癌组织中COX-2的阳性表达率为66%,COX-2阳性者预后不佳。又有动物实验证明了COX-2抑制剂可以预防乳腺癌的发生[7]。�有研究表明在乳腺上皮的癌变过程中,COX-2的过度表达是较早期事件[8]。乳腺癌前病变、癌组织中COX-2的表达逐渐增强，提示从高度增生的乳腺上皮转化为恶性上皮细胞的演变中COX-2起着重要的作用。Harris等[9]发现选择性COX-2抑制剂celecoxib可以使女性患乳

8、腺癌的风险降低71%。�Shim等[10]报道46例导管原位癌COX-2阳性率是85%,其表达