胚胎早期发育体外共培养体系的比较论文

《胚胎早期发育体外共培养体系的比较论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、胚胎早期发育体外共培养体系的比较论文【摘要】目的探讨共培养体系中体细胞对胚胎早期发育的影响及比较2种常用共培养体系的优劣。方法实验分3组:同种不同类型体细胞,受精卵分别在含颗粒细胞和成纤维细胞的M199培养液中培养;异种同类型体细胞,受精卵分别在含牛颗粒细胞和小鼠颗粒细胞中M199培养液中培养;2种共培养体系比较,受精卵分别在“M199+颗粒细胞”和“B2+Vero细胞”的共培养体系中培养。结果颗粒细胞组较成纤维细胞组囊胚率高(P0.05);牛颗粒细胞组和小鼠颗粒细胞组在卵裂率和囊胚率方面差别无统计学意义;“M199+颗粒组”在卵裂率和囊胚率方面与“B2+Vero

2、组”差别无统计学意义,但囊胚细胞数较少(P0.05)。结论在一定的条件下,共培养体系中体细胞对胚胎早期发育有一定影响;“B2+Vero细胞”的共培养体系优于“M199+颗粒细胞”的共培养体系。【关键词】胚发育共培养ABSTRACT:ObjectiveTostudytheeffectofsomaticcellcoculturesystemontheearlybovineembryodevelopmentandparisonofts.MethodsExperiment1:thesomaticcellsebreedbutdifferenttypes(granulece

3、llgroupandfibroblastgroup);experiment2:thesomaticcellsetypebutdifferentbreeds(bovinegranulecellgroupandmousegranulecellgroup);experiment3:paret(M199+granulecellgroupandB2+Verocellsgroup).ResultsInexperiment1,granulecellgroupilartofibroblastgroupincleavageratebuthigherinblastocystrate;

4、inexperiment2,thereent3,thereberofblastocystsinB2+Verocellsgroupaticcellcoculturesystemmayhaveaneffectontheearlyembryodevelopmentsomeconditions,andthecoculturein“B2+Verocells”isbetterthanin“M199+granulecells”forbovineearlyembryodevelopment.KEY199培养液含牛颗粒细胞单层中培养;成纤维细胞组,受精卵培养全程均在M199培养

5、液含牛成纤维细胞单层中培养。(2)异种同类型体细胞:牛颗粒细胞组,受精卵培养全程均在M199培养液含牛颗粒细胞单层中培养;小鼠颗粒细胞组,受精卵培养全程均在M199培养液含小鼠卵丘细胞单层中培养。(3)两种共培养体系比较:M199+颗粒组,受精卵培养全程均在M199培养液含牛颗粒细胞单层中培养;B2+Vero组,受精卵培养全程均在B2培养液含Vero细胞单层中培养。1.2方法1.2.1卵丘卵母细胞复合体(COC)获得通过活体取卵(ovumpickup,OPU)方式获得,具体操作见文献2。1.2.2卵母细胞体外成熟、体外受精和体外培养参照文献3,COC在成熟液(T

6、CM199+10%FBS+LH10μg/mL+E21μg/mL+FSH1μg/mL)中培养23～24h。培养条件:体积分数为0.05的CO2、38.5℃、饱和湿度。使用同一公牛同一批号的冻精液进行受精,受精液为BO液,使精子的最终密度约为1×106mL-1。置CO2培养箱精卵共孵育6～8h。将受精卵按每50μL10～20个移入体外培养滴。每隔48h半量更换培养液。受精48h后计算卵裂率,第8天计算囊胚率。1.2.3共培养体系中体细胞单层制备牛颗粒细胞单层:从OPU收集到的检卵液中挑选光泽度好、细胞致密的颗粒细胞碎片,加入0.25%胰酶吹打1min,离心洗涤2次,

7、体外培养液悬浮细胞,细胞长满约80％加入受精卵。小鼠颗粒细胞单层:雌性昆明白小鼠腹腔注射孕马血清促性腺激素PMSG(10IU),48h后注射人绒毛膜促性腺激素HCG(10IU/),13～15h后输卵管壶腹部取卵,用透明质酸酶消化COC,收集消化下来的卵丘细胞,体外培养液离心洗涤2次,悬浮细胞,细胞长满约80％时,加入受精卵。Vero细胞单层:用0.25%胰酶消化长至70％～80％的Vero细胞,离心洗涤2次,B2培养液悬浮细胞,细胞长满约80％时,加入受精卵。牛成纤维细胞单层:选用2～5代的牛成纤维细胞,M199体外培养液离心洗涤2次,悬浮细胞,细胞长满约80％时

8、,加入受精