对乙酰氨基酚实验.doc.gzip

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1、对乙酰氨基酚的生物利用度和药物动力学参数的测定2008级药本药物动力学实验2011-4【实验目的】１．通过实验掌握兔体内血药浓度的测定方法。２．掌握用血药浓度法计算药物的动力学各参数。【实验原理】对乙酰氨基酚水解生成对氨基苯酚，对氨基苯酚在次溴酸钠的存在下，能与苯酚产生反应，生成靛蓝染料，靛蓝染料在波长620nm处有最大吸收。为了排除血浆中蛋白的干扰，测定血药浓度时首先应加入适量20％的三氯醋酸沉淀蛋白。【实验方法】血药标准曲线的制作及求出回归方程:【EP管的准备】EP管6支洗净编号，标号S1到S6，备用。【对乙酰氨

2、基酚标准液的制备】a精密称取105℃干燥恒重的对乙酰氨基酚粉末400mg，用热蒸馏水溶解于100ml容量瓶中，冷却至室温后稀释至刻度，至冰箱保存备用（4000μg/ml）。b分别精密吸取上述4000μg/ml的浓贮备液1.0ml、2.0ml、3.0ml、5.0ml、7.0ml于100ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，得40μg/ml、80μg/ml、120μg/ml、200μg/ml、280μg/ml、400μg/ml的标准溶液。**【空白血浆的制备方法】将实验动物家兔耳缘静脉处毛拔掉，涂擦酒精，用100W灯泡烤5m

3、in，将耳静脉横向切开，用经1％肝素溶液处理并烘干的离心管采血约9ml。然后将刀口贴上棉球，用夹子夹住。离心得上清液血浆约4.5ml，制备标准曲线用3ml。余下部分放置冰箱供测样品用。【显色操作】按照表A操作至求出回归方程。操作步骤表中部分试剂的准备方法:【20%三氯醋酸溶液的制备】称取三氯醋酸20g，加蒸馏水溶解，稀释至100ml。【40%NaOH溶液的制备】称取氢氧化钠40g，加蒸馏水溶解，稀释至100ml。【4mol/LHCl溶液】取33.2ml浓盐酸，加蒸馏水溶解，稀释至100ml。【显色剂的制备】a、【0.

4、2mol/L氢氧化钠溶液】称取8g氢氧化钠，溶解于蒸馏水中，稀释至1000ml。b、【1%酚溶液】吸取1ml液化酚（含量99%以上）溶解于蒸馏水中，稀释至100ml。（临用前新鲜配制）c、【饱和溴水溶液】取适量液态溴，加入蒸馏水中，振摇溶解，放置至少24h后再使用。d、【碳酸钠-溴溶液(0.5mol/L)】称取106g无水碳酸钠。溶解于蒸馏水中，添加15ml饱和溴水溶液混合均匀，稀释至100ml。（临用前新鲜配制）e、【显色剂】取0.2mol/L氢氧化钠溶液80ml，加1%酚溶液10ml。振摇混匀后，加入碳酸钠-溴溶

5、液100ml，混匀即得。步骤二：动物给药及血药浓度的测定A静脉注射给药途径：【动物】取雄性家兔（3kg以上）1只，称重记录。【EP管的准备】10ml的EP管（8支+8支）洗净编号，经100unit/ml肝素溶液（配法为肝素注射剂一支溶于250ml生理盐水中）处理，烤干（105℃）。【对乙酰氨基酚注射液的配制】精密称取对乙酰氨基酚0.5g，置小烧杯中，加50%丙二醇（混溶剂）水溶液5ml，加热37℃下使溶解即成，浓度为100mg/ml。【给药】按照60mg/kg静脉注射上述注射液。【取血】以上两种途径给药后立即记录注射

6、时间，并按此时间开始0min、5min、15min、30min、1h、1.5h、2.5h、4h、6h定时采血约1.5ml（换算成滴数＝滴），每份样品离心10min（3500转/分），将上清液血浆转移至另一个对应编号的洁净干燥1.5ml的EP管中，置冰箱保存。【显色操作】按照表B操作至得到实验结果。B口服给药途径：【动物】取雄性家兔（3kg以上）1只，称重，实验前禁食24h。【给药】口服给药0.5g。其余步骤同A给药途径的各对应步骤。【实验要求】略附1：家兔的采血方法1、家兔耳缘静脉采血穿刺采血法：是家兔最常用的采血方

7、法。具体方法同耳缘静脉注射给药。此法一次可采血5～lOml，可多次重复使用。针头不可连接注射器，直接让血液滴在有抗凝剂的试管内。切割采血法：当兔耳部血管被充分扩张后，可用刀片割破耳缘静脉，或用注射针刺破耳缘静脉，让血液自然流出。采血穿刺和注射穿刺方向不同。采血穿刺逆血流方向行针，采血量越大，越要靠近根部行针。2、兔耳中央动脉采血：经兔耳中央的一条较粗、颜色鲜红的动脉采血，可采到约15ml/次血。操作方法基本与静脉采血同。由动脉末端，朝向心方向进针，取血完毕后注意止血。附2：直线回归方程的求法（最小二乘法）Y=a+bX

8、b=(∑XiYi-nX平Y平)/(∑Xi^2-n(X平^2))a=y(平均)-bx（平均）直线回归方程的一般形式为：　　（应变量）：一般是难测（或不可测）的变量。X（自变量）：一般是可测或人为给定的量的变量。a：为常数项，又称截距；　　b：为斜率，又称回归系数，表示自变量X增加（或减少）一个单位，应变量Y平均改变的单位数。b为正，表示X增加，Y