评价肺炎链球菌疫苗免疫效果的功能性抗体检测方法的建立

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1、功能性抗体检测方法的建立强▲李江姣杜慧竟石继春徐苗叶中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室，北京100050[摘要]目的建立肺炎球菌疫苗免疫效果评价的功能性抗体滴度检测方法。方法参考美国阿拉巴马大学的多重调理吞噬实验（MOPA）方法，构建并鉴定HL-60效应细胞库、肺炎球菌工作菌种库和补体；在此基础上对5份血清样本进行调理吞噬活性检测。结果HL-60细胞分化后表面标志表达量CD35为71.78％，CD71为10.97％，活细胞比例为72.96%。13个血清型的肺炎链球菌工作菌种的冻存复活率均高于90%；抗

2、生素抗性与敏感性与预期结果一致；工作稀释度均≥1000。补体的非特异性杀菌率均≤70%。血清样本的杀菌曲线均为标准的S型，平行孔间的差异不超过3倍。结论效应细胞、工作菌种、补体及血清样本的检测结果均符合阿拉巴马大学参考方法的标准要求，成功建立了基于MOPA的功能性抗体检测方法。[关键词]肺炎链球菌；疫苗；功能抗体；调理吞噬试验[中图分类号]R392[文献标识码]A[文章编号]1673-7210（2014）07（b）-0004-05Establishmentoffunctionalantibodydetectionmethodforev

3、aluationofpotencyofpneumococcalvaccineLIJiangjiaoDUHuijingSHIJichunXUMiaoYEQiang▲KeyLaboratoryforStandardizationofMethodsforQualityControlofBiotechnicalProducts,MinistryofHealth,NationalInstitutesforFoodandDrugControl,Beijing100050,China[Abstract]ObjectiveToestablishthe

4、functionalantibodydetectionmethodforevaluationofimmuneeffectofpneu-mococcusvaccine.MethodsTheeffectorcellcultures,workingbacteriastocksandcomplement,whichwereimportantcomponentsofmultiplexedopsonophagocytickillingassay(MOPA)methodwereconstructedanddetectedforapplica-bil

5、ityaccordingtothereferencemethodpublishedbyWHOreferencelaboratoryinUSUniversityofAlabamaatBirm-ingham(UAB).TheopsonophagocytictitersoffiveserasamplesweredeterminedusingtheestablishedMOPAmethod.ResultsAfterdifferentiationofHL-60cells,theexpressionofcellsurfacemarkersCD35

6、andCD71were71.78％and10.97％,respectively,andtheproportionoflivecellswas72.96%.Thepercentagerecoveryofworkingbacteriastocksofallserotypesweremorethan90%.Theantibioticsensitivityandresistanceofthefrozenassaystockswereaccor-dancewiththeexpectedresults.Theoptimaldilutionfact

7、orforalltheassaystocksweremorethan1000.Thenon-specifickillingratesofcomplementforallserotypeswerelessthan70%.Thesample'skillingcurvesforallserotypesweresigmoidshape,andtheopsonophagocytictitersoftheduplicatesweredifferbylessthan3-fold.ConclusionThedetectionresultsofthee

8、ffectorcellcultures,workingbacteriastocks,complementandserasamplesmeettherequire-mentsofreferencemethodofUAB,i