资源描述：
《哺乳仔猪渗出性皮炎的病原学诊断及综合防治》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、哺乳仔猪渗出性皮炎的病原学诊断及综合防治?84?AnimalHusbandry&VeterinaryMedicine2009Vo1.41No.9哺乳仔猪渗出性皮炎的病原学诊断及综合防治齐静,孙守礼,杜以军,白华,朱小玲,张秀美,刘玉庆(1.山东省农科院畜牧兽医研究所山东省畜禽疾病防治与繁育重点实验室,山东济南250100;2.Department0fPathogenicOrganism,University0fIllinois,Urbana,IL61082,USA)摘要:对发生渗出性皮炎
2、(exudativeepidermitis,EE)的病死仔猪进行病原学诊断,通过染色特性,生化试验,致病性试验及药敏试验,结合PCR方法对其16SrDNA基因序列分析进行鉴定.结果表明,病原为猪葡萄球菌和松鼠葡萄球菌混合感染,对小鼠均有致病性,且能从死亡小鼠上分离到相同病原菌.分离菌株混合培养物对头孢类等药物高度敏感,对氯霉素等药物中度敏感,对四环素和红霉素耐药.提示可使用敏感药物进行预防和治疗,注重平时的饲养管理和环境消毒是预防本病的重要措施.关键词:仔猪;渗出性皮炎;葡萄球菌;药敏试验;防治
3、中图分类号:$858.28文献标识码:B文章编号:0529—5130(2009)09—0084—05猪渗出性皮炎主要是由葡萄球菌引起的哺乳仔猪的一种传染病,又称脂猪病,猪油皮病,主要表现为体表流出黏性渗出液,使污物附着于猪的体表而使被毛结痂成黑色.本病发病快,传播快,死亡率不等,但严重影响仔猪的发育,造成很大的经济损失,引起养猪业的重视.该病病原猪葡萄球菌(Staphylococcushyicus)早在1953年就已被报道,2007年Chen等报道了引起该病的另一个病原一猪源松鼠葡萄球菌(S.s
4、ciuri).本研究从山东省某规模化猪场发生渗出性皮炎的仔猪病料中分离细菌,进行系统鉴定和分析,为兽医临床渗出性皮炎的诊治提供一定的参考.1材料和方法1.1病料山东省某规模化猪场疑似仔猪渗出性皮炎的发病猪和死亡时间小于12h的猪.1.2载体与受体菌克隆载体pMD18一T载体购自TaKaRa公司.大肠杆菌(E.coli)DH5ot为本实验室保存.1.3主要试剂科玛嘉致病性金黄色葡萄球菌培养基,高盐甘露醇培养基,麦康凯琼脂培养基,血琼脂基础培养基,MH培养基,0.5麦氏比浊管,药敏纸片,革兰氏染色液
5、等购自杭州天和微生物试剂有限公司.细菌基因组DNA提取试剂盒购自日本博日公司.10~PCRbuff-er,TaqPlusDNAPolymerase,dNTPMix,DNAMark一收稿日期:2008—11—24基金项目:山东省农业科学院高技术自主创新基金(2006YCX023).作者简介:齐静(1979一),女,硕士.对本文有同等贡献.通讯作者.erDI2000,DNA琼脂糖凝胶回收试剂盒等购自大连宝生物生物工程有限公司,其他试剂均为国产或进口分析纯.1.4引物用于16SrDNA的PCR反应引物
6、是Messick等报道的通用引物对,上游引物5一AGAGTITrGATC—CTGGCTCAG.3;下游弓I物5.AAGGAGGTGATC-CAGCC..3.该引物能扩增大多数真细菌近乎全长的16SrDNA基因,由上海博亚公司合成,预计扩增片段为1500bp.1.5临床和剖检变化通过实地考察和间接询问了解发病猪的临床症状,包括被毛,精神,食欲及体温情况,了解发病猪场用药情况,对病死猪进行剖检观察记录.1.6组织病理学观察取发病猪的脏器如肝脏,肺脏和淋巴结等组织,用4%的甲醛固定后,常规制备石蜡切片
7、,HE染色,在显微镜下观察组织病理学变化并拍照记录.1.7细菌的分离培养及形态观察无菌采集病初仔猪的丘疹处(痂块下渗出液)和病死猪的肝,脾,'肾,心血和腹股沟淋巴结等脏器组织分别接种于普通肉汤,鲜血琼脂,麦康凯琼脂培养基,高盐甘露醇培养基和科玛嘉金黄色葡萄球菌显色培养基,37cc培养24h.挑取表面光滑,边缘整齐,灰白色透明的单个小菌落划线接种于麦康凯平板上,37℃培养24h_4J.取高盐甘露醇培养基和鲜血琼脂培养基上培养24h的菌落,制备抹片,进行革兰氏染色镜检.1.8生化试验糖发酵及生化反应
8、按参考文献[5]的方法进行.过氧化氢酶试验:取1mL3%的过氧化氢倾注于普通琼脂平板上生长的菌落,如立即产生大量的气畜牧与兽医2009年第41卷第9期泡,则结果为阳性.血浆凝固酶试验:于无菌试管内加入3%的枸橼酸钠0.5mL,无菌采取兔静脉血2mL,离心5min,取血浆1mL,加5滴肉汤培养物,摇匀,37℃下放置6h后观察培养物,由液体变为胶胨状,说明凝固酶试验阳性.1.9致病性试验将分离细菌接种于普通肉汤中,37℃培养24h后备用.用平板计数法测定其数量为2×10CFU/mL.选择健康的体重为
