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1、G蛋白偶联受体激酶4基因变异与原发性高血压的相关性48现代检验医学杂志2006年5月第21卷第3期】M0dLabMed.May2006,Vo
2、.21.No.3G蛋白偶联受体激酶4基因变异与原发性高血压的相关性曹军,朱健华,崔之础0,张东雷0,施健0(南通大学附属医院1.心内科;2.基因诊断研究室,江苏南通226001)摘要:目的探讨G蛋白偶联受体激酶4基因变异与原发性高血压的关联.方法应用等住基因特异性PCR结合实时荧光分析的方法,对中国江苏南通地区102例健康人,93例原发性高血压患者的CRK4多态住点A486V进行基因分型,并进行关联分析.结果V等位基因频率原发性高血压组(
3、56.9)显着高于正常血压对照组(44.1%),差别有统计学意义(P<0.05),高血压组中V/V基因型频率(32.4)明显高于对照组(18.3Z,P<O.05).结论在中国江苏南通地区汉族人中,GRK4多态住点A486V可能与原发性高血压的发病有关,v/v基因型是遗传易患因子.关键词:G蛋白偶联受体激酶4;基因变异;原发性高血压;实时荧光等位基因特异性PCR中图分类号:Q754(253NT)R544.1文献标识码:A文章编号:1671—7414(2006)03—048—03人类G蛋白偶联受体激酶4是G蛋白偶联受(v/v)甘油],10mmol/IMgC122l,10
4、lmol/I体激酶(Gprotein—coupledreceptorkinases,引物Common0.4l,AS-1或AS一20.4l,Ac—GRKs)超家簇中的一员,基因定位于染色体4pl6.cuPrimeTaqDNA聚合酶0.2l(Invitrogen公3编码四种蛋白分别为GRK4a,GRK4t~,GRK4Y,司),20XSYBRGREE10.5l,基因组DNA1l,GRK43参与机体对血压的调控[¨.笔者采用等位补无菌去离子水至2Ol.反应在LightCycler基因特异性PCR结合实时荧光分析的方法,对中(Roche公司)上进行.94℃2rain预变性同时激国江苏南通
5、地区102例健康人,93例原发性高血活AccuPrimeTaqDNA(hot-start)后采用两步法压患者的GRK4Y多态位点A486V进行基因分扩增,95℃0S,64℃15S共4O个循环,每次循环型,探讨GRK4基因变异与原发性高血压(essen一后在81℃读取荧光信号.tialhypertension,EH)的关系.1.3统计学处理基因频率用基因计数法计算,1研究对象与方法各组基因频率采用X检验,P<O.05表明差异有1.1对象①高血压病组(EH组):选取2005年统计学意义,数据处理由STATA7.0计算机软件7月～2006年1月在南通大学附属医院门诊及住完成.院
6、的原发性高血压患者,共93例(男49例,女442结果例,均龄60.2土9.4y),诊断标准按照《1999WHO/2.1样本基因型确定每个样本需做两次平行ISH高血压治疗指南》的分类标准:收缩压≥140PCR反应,依据扩增曲线判断基因型.如果两次反mmHg和(或)舒张压≥90mmHg,有高血压病史应都有典型的扩增曲线,解离曲线分析提示有相应或正在服用抗高血压药物,并排除各种继发性高血的扩增产物则该样本基因型为杂合型即A/V型,压,先天性心脏病,心肌病,风湿性心瓣膜病,糖尿如果两次反应曲线中只有一次为上述情况则为纯病和高血压合并冠心病等.②选择同期性别,年龄合型即A/A型或V/V型
7、(图1和图2).部分样本匹配的健康人作为正常血压对照组(NH组)共102扩增产物采用3g/dl琼脂糖凝胶电泳结果与荧光例(男54例,女48例,均龄58.3土10.9Y),均来自分析一致(杂合子两次电泳都有目的条带出现,纯我院体检中心同期健康体检者,血压正常,无高血合子只有一次电泳有目的条带出现,图3).压病家族史,排除各类心脑血管病,糖尿病,肝,肾功能不全者.1.2方法基因组提取纯化试剂盒(Fermentas公司)提取研究对象的全基因组DNA,引物设计使用Oligo6.67软件包,由上海生工合成,Common:5'TTTGCTGGGCGTTTCATT一3';AS1:5'CCAG
8、GTAGATCCCTTTCACCA3',AS一2:5'CCAGGTAGATCCCTTTCACCG一3',产物大小为156bp,预测的解链温度为86.3℃.PCR体系包括10×缓冲液2.0vie包含15mmol/IMgC1z,2mmol/LdNTP,热稳定AccuPrime蛋白,1O0246810I214I618202426283032343840CycleNumber图1实时荧光扩增曲线作者简介:曹军.男.南通大学硕士研究生在读,研究方向;心血管疾病基因多态性.现代检验医学杂志2006年5月
