中药天年饮对衰老大鼠睾丸生精细胞增殖及相关因素的作用论文

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1、中药天年饮对衰老大鼠睾丸生精细胞增殖及相关因素的作用论文薛景凤，宋成军，李健，陈志宏【关键词】天年饮；,,衰老；,,睾丸；,,增殖细胞核抗原；,,端粒酶摘要：目的研究中药天年饮对衰老大鼠睾丸生精细胞增殖及相关因素的影响。方法40只SD大鼠随机分为4组，正常组、衰老模型组、天年饮用药组及阴性对照组，每组均为10只。D-半乳糖连续腹腔注射制作亚急性衰老的大鼠模型。采用ELISA方法检测各组大鼠血清睾酮含量、SP免疫组化法检测睾丸生精细胞PA、端粒酶的表达情况。结果衰老大鼠血清睾酮含量、睾丸PA阳性细胞率及生精细胞端粒酶的表达明显低于正常大鼠（P＜0.05，P＜0.0

2、1）。天年饮可明显提高衰老大鼠血清睾酮含量（用药组与模型组比较P＜0.05）、提高睾丸PA阳性细胞率（用药组与模型组比较P＜0.01）及提高衰老大鼠端粒酶的表达。结论天年饮可明显改善衰老大鼠的生精功能，具有一定延缓衰老的作用。关键词：天年饮；衰老；睾丸；增殖细胞核抗原；端粒酶EffectsofTraditionalChineseMedicineTiannianyinonPAExpressionandRelatedFactorsofSpermatogenicCellsinTestisofAgingRatsAbstract:ObjectiveToobservethe

3、effectsoftraditionalChinesemedicineTiannianyinonPAexpressionandrelatedfactorsofspermatogeniccellsintestisofagingrats.Methods40SDrats:normalgroup,agingmodelgroup,Tiannianyingroup,negativecontrolgroup,andeachgrouphad10rats.ThesubacuteagingmodelratsadebyinjectingDgalintoabdominalcavityc

4、ontinuousl.ELISA,.freelmunohistochemistrytoobservethePAandtelomeraseexpressionofspermatogeniccellsintestis.ResultsThetestosteronecontentinserum,thePApositivecellrateandthetelomeraseexpressionofagingratsalrat(P＜0.05,P＜0.01).Tiannianyincouldincreasethetestosteronecontentinserum(P0.05),

5、thePApositivecellrate(P＜0.01)andthetelomeraseexpressionobviously.Conclusion:TraditionalChinesemedicineTiannianyincanimprovethespermatogenicfunctionsofagingratsobviously,andhasfairlyantiagingeffects.Keyerase中药延缓衰老作用的研究已逐渐深入.freelg/kg，1次/d,共40d)制作亚急性衰老的大鼠模型。模型组大鼠于造模成功后不再作任何处理；用药组大鼠于造模成

6、功后每天用天年饮灌胃，共30d；阴性对照组大鼠在造模成功后每天灌胃同等剂量的生理盐水，时间同用药组大鼠。1.2药品及试剂天年饮由何首乌、怀牛膝、肉苁蓉、淫羊藿、丹参、茯苓6味中药组成,经熬制后每毫升含生药1.5g按8.1g/kg灌胃。D半乳糖，北京化学试剂公司生产（批号：020402）。检测血清睾酮含量的ELISA试剂盒、PA免疫组化试剂盒、端粒酶免疫组化试剂盒均购自北京中山生物技术有限公司。1.3指标的检测1.3.1血清睾酮含量的检测大鼠经内眦取血,离心取上清，采用ELISA方法检测大鼠血清睾酮含量。1.3.2睾丸生精细胞PA表达的观察及定量数据处理2.5%戊

7、巴比妥腹腔注射（0.3ml/100g）麻醉大鼠，4%多聚甲醛灌注固定，取双侧睾丸入4%多聚甲醛后固定。将固定好的组织块经常规梯度酒精脱水，二甲苯透明，石蜡包埋。Leica石蜡切片机连续切片，片厚5μm，每隔20张取蜡带贴于涂有APES的载玻片上。SP免疫组化染色（一抗为鼠抗PA1∶100）显示生精细胞PA的表达，DAB显色，苏木精复染。阴性对照用PBS代替一抗。以细胞内出现棕黄色粗颗粒或细腻颗粒弥漫分布为阳性反应。在显微镜(10×40倍)下进行细胞计数，每张切片上随机选取10个视野，每个视野计数总细胞数和阳性细胞数，计算出阳性细胞的百分比。每组计数3只动物的睾丸

8、，每个标本计数3张切片。