多房棘球绦虫混合重组bcg论文

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1、多房棘球绦虫混合重组BCG论文【关键词】多房棘球绦虫；重组BCGInhibitiononapoptosisofsplenocytesinmiceimmunizedixedrBCGEmⅡ/3andrBCGEm1433vaccineagainstEchinococcusmultilocularis【Abstract】AIM:ToimmunizemiceixedrBCGEmⅡ/3andrBCGEm1433vaccineagainstEchinococcusmultilocularis(Em)andtoinvestigatetheapoptosisofsp

2、leencellschallengedprotoscoleces.METHODS:Balb/cmiceixedrBCGvaccinesrespectively.Eighteenprotoscolecesthemiceeasureapoptoticratebyfloetry.Blankvector,BCGandPBSservedascontrols.RESULTS:ApoptoticrateintheimmunizationgroupicemaybeinducedbyinfectionmunizationixedrBCGEmⅡ/3andrBCGEm1

3、433vaccine.【Keyultilocularis;rBCGEmII/3vaccine;rBCGEm1433vaccine;spleen/cytology;apoptosis【摘要】目的：多房棘球绦虫混合重组BCGEmⅡ/3和BCGEm1433疫苗免疫小鼠并以Em原头节攻击后探讨以上疫苗对小鼠脾细胞凋亡的变化.方法：将混合重组BCG疫苗采用皮下注射和鼻腔内接种分别免疫Balb/c鼠8Ⅱ/3和BCGEm1433疫苗可在一定程度上抑制感染鼠脾细胞的凋亡.【关键词】多房棘球绦虫；重组BCGEmⅡ/3疫苗；重组BCGEm1433疫苗；脾/细胞学；细胞

4、凋亡0引言Ameisen等［1］认为某些寄生虫感染诱导的凋亡在疾病的发病机制中起重要作用.人们发现小鼠感染恶性疟原虫(Plasmodiumfalciparum)或日本血吸虫(schistosomajaponicum)以及大鼠感染卡氏肺孢子虫(pneumocystiscarinii)后均可诱导其脾细胞发生凋亡［2-4］.泡型包虫病(alveolarechinococcosis,AE)是由多房棘球绦虫(Echinococcusmultilocularis,Em)的中绦期幼虫寄生在人体肝脏引起的一种严重危害人类健康的人畜共患寄生虫病.当前分子生物学技术的

5、发展为研制理想的Em疫苗提供了新方法，将Em外源DNA引入特定疫苗载体构建重组活疫苗可将保护性抗原传递至宿主免疫系统.王昌源等［5］发现EmⅡ/3重组抗原（ELP蛋白）是一种有较好保护性免疫力的抗原分子.SilesLucas等［6］证实Em1433抗原位于Em原头蚴的生发层，其过度表达与原头蚴的进行性、侵入性和无限制生长特性有关.freeletteGuerin,BCG）是一种理想的疫苗载体.Matsuo等［8］在BCG中成功构建了外源抗原分泌系统，这为发展BCG成为多价疫苗载体打下了坚实的基础.本实验我们在成功构建重组BCGEmⅡ/3和BCGEm1

6、433疫苗的基础上［9-10］，等量混合以上两种疫苗作为混合疫苗免疫小鼠,原头节攻击免疫鼠并观察其脾细胞凋亡的情况，从而为研究该疫苗的保护性免疫机制提供有价值的实验数据.1材料和方法1.1材料65只雌性Balb/c小鼠，12～14周龄，体质量20～25g，购自重庆医科大学实验动物中心；多房棘球绦虫重组BCGEmⅡ/3和BCGEm1433疫苗由本室构建［9-10］，将rBCGEmⅡ/3和rBCGEm1433疫苗按1∶1的浓度比例混匀，组成混合疫苗；ConA购自Sigma公司.AnnexinVFITC试剂盒(LHK601100)购自深圳晶美生物工程公司

7、.1.2方法1.2.1实验分组65只雌性Balb/c小鼠随机分为5组，每组13只.第1组为5×106cfu混合疫苗悬浮于100μLPBS于小鼠后背部皮下单次注射；第2组为5×105cfu疫苗悬浮于10μLPBS于小鼠鼻腔黏膜单次接种；第3组为5×106cfu的空载体（含pBCG质粒的BCG）皮下单次注射对照组；第4组为5×106cfu的BCG皮下单次注射对照组；第5组为100μLPBS皮下单次注射对照.1.2.2攻击感染多房棘球绦虫混合重组BCGEmⅡ/3和重组BCGEm1433疫苗免疫8L/L乙醇消毒、无菌取脾脏、匀浆、200目尼龙网过滤；灭菌双

8、蒸水溶解红细胞后，用含100mL/L灭活小牛血清的RPMI1640培养液调整细胞浓度为5×109/L，并加入青霉素1×10