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1、急性重症胰腺炎湿热证动物模型建立初探论文.freelalmodelingofacutefeverdiseasep-heatsyndromebyusingratmodelsofsevereacutepancreatitis(SAP).MethodSAPtaurocholate.Thebodyperature,.freelentalstatus,stools,furoftongue,etc.odelmade.Aarkertoevaluatedamp-heatsyndromeoftheanimalmodel.Ratsly：SAPgrou
2、p,shamoperated(SO)groupandcontrol(C)group.SAPgroupp-heatsyndromegroupaltonguecoating).Thelevelofserumamylase,endotoxin,TNFandthepathologicallesionscoresofpancreastissueodels.ThelevelofplasmaendotoxinandserumTNFperatureofratmodelsodelcanbeconsideredasagoodanimalmodelin
3、accordancep-heatsyndrome,almodelforexploringthepathogenesisofdamp-heatsyndrome.Keyalmodel;rats;damp-heatsyndrome;pancreatitis湿热证是中医急性热性病中具有特殊规律的一类征候群。临床上许多急性感染性疾病患者在发病过程中表现湿热证候,予以西医常规抗感染综合治疗效果不理想,病情缠绵难愈,其病机及临床研究已成为近年的热点。借鉴现代医学研究成果,模拟中医热性病湿热证发病机制,建立理想动物模型,亦是揭示热性病湿热证本质的
4、关键环节。目前,国内有关湿热证的动物模型多根据中医学关于湿热的成因来模拟建立,采用综合因素造模,即高温、高湿环境及高脂饮食,加上病原微生物感染。但临床常见急性感染性疾病患者,在起病急骤、病程很短的情况下即可出现舌苔厚腻的“湿”象,并没有高温、高湿的外在因素影响。对于此类急性热性病湿热证证型实质的研究,目前并没有与病情发展相符合的动物模型可供借鉴。急性重症胰腺炎(SAP)患者病情发展过程中常见湿热证,故本研究采用SAP来建立一个与临床急性热性病湿热证相符合的动物模型,根据证象(主要是舌苔厚腻)判断湿热证的有无,从而建立湿热证的动物模
5、型。1材料与方法1.1动物SPF级雄性SpragueDaL/100g,购自美国Amresco公司)方法制作模型1。步骤如下：2%戊巴比妥钠(50mg/kg,购自德国Merck公司)腹腔内注射麻醉,沿正中线剑突下逐层切开腹壁进入腹腔,于十二指肠内侧见片状分布的胰腺,找到胆胰管,肝门部胆胰管用无损伤动脉夹夹闭,从胆胰管开口十二指肠系膜缘对侧肠壁穿刺插入4号静脉穿刺针头,进入肠腔后对准膨大壶腹中心插入胆胰管约1cm,微量泵以0.1mL/min速度推注5%牛磺胆酸钠,观察2～4min后拔管,去除动脉夹,缝合十二指肠穿刺口并关腹,术中注意无
6、菌操作。术毕皮下注射2mL/100g生理盐水,以补充丢失水分。大鼠清醒后自由饮水、进食。SO组：采用0.9%氯化钠溶液代替5%牛磺胆酸钠方法制作模型,具体步骤同上。大鼠清醒后自由饮水、进食。C组：正常饮水,进食。1.4检测项目1.4.1证象观察造模后每只大鼠逐日称体重及测量肛温,观察精神、毛色、大便及舌质、舌苔等证象。1.4.2血淀粉酶测定造模后第1、2、3、5日,SAP组、SO组分别取6只大鼠,麻醉后心脏采血处死,留取血液-20℃保存备用,采用麦芽糖苷法测定血浆淀粉酶水平。1.4.3胰腺组织病理检查造模后第1、2、3、5日,SA
7、P组、SO组分别取6只大鼠,麻醉后心脏采血处死,留取胰腺组织,4%多聚甲醛固定,常规苏木精-伊红染色行病理检查。胰腺组织经固定后,常规石蜡包埋,4μm切片。二甲苯脱蜡,经各级乙醇至水洗,入苏木精染液染色10min,自来水冲洗。盐酸乙醇分化约10s,至细胞核着色较深,其他结构无色时为宜。入自来水缓洗约20min,使苏木精“蓝化”,胞核呈蓝色。经蒸馏水洗后,入伊红染液染色约10min,用蒸馏水洗去多余的伊红。常规脱水,透明,封片。应注意在苏木精和伊红染色时,须随时在显微镜下观察是否适当,如染色过浅,应重复染色。1.4.4血浆内毒素测定
8、大鼠血浆内毒素测定采用鲎试剂基质偶氮显色定量法。1.4.5血清肿瘤坏死因子α测定按照肿瘤坏死因子α(TNF-α)定量酶联检测试剂盒说明书进行测定。1.5统计学方法用SPSS11.5软件包进行统计学分析。所有计量数据采用±s表示,组间比较采用单因素方
