真核化的原核表达系统增强hbv pres2-s基因免疫的效果的论文

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1、真核化的原核表达系统增强HBVpreS2/S基因免疫的效果的论文【摘要】目的：研究真核化的原核表达系统——pcmvt7pol/pt7ireshbs双质粒共表达体系与常规真核表达质粒相比在真核细胞中的表达差异；基因免疫小鼠诱生特异性体液免疫应答的能力及二者所诱生的抗体亚型的差异。方法：运用分子生物学方法构建真核化的原核表达系统，将构建的质粒进行基因免疫，应用doteia和elisa等检测其所产生的抗体水平。结果：①真核化的原核表达系统在真核细胞中的表达能力明显强于常规真核表达质粒。②真核化的原核表达系统基因免疫小鼠不仅可诱生特

2、异性体液免疫应答，且具有明显增强效应（p＜0.05）。③真核化的原核表达系统与常规真核表达质粒相比不仅可诱生同等程度的th1型免疫应答，而且能够诱生更强的th2型免疫应答（p＜0.01）。结论：真核化的原核表达系统——pcmvt7pol/pt7ireshbs双质粒能诱导较强的体液免疫应答。【关键词】真核化的原核表达系统基因免疫hbv　　enhancingeffectofeukaryonizedprokaryoticexpressionsystemonhbvpres2/sgeneimmunization　　yuanzhigan

3、g,zhangjinping,entofimmunology,shanghaimedicalcollege,fudanuniversity,keylaboratoryofmolecularmedicineofministryofeducation,shanghai200032,china　　［abstract］objective:toinvestigatethedifferenceofexpressionlevelbetandeukaryonizedprokaryoticexpressionsystemmadeofpcmvt7

4、polandpt7ireshbsineukaryoticcellenvironment.methods:eukaryonizedprokaryoticexpressionplasmidmunizeid;theantibodyinducedbytheseplasmidonstratedthattheeukaryonizedprokaryoticexpressionsystemcouldefficientlyenhancetheexpressionleveloftargetgeneineukaryoticcells.tofurthe

5、rinvestigatetheabilityofeukaryonizedprokaryoticexpressionsystemtoinducehbvspecifichumoralimmuneresponse,miceuscularlyimmunizedixtureoftheplasmidpcmvt7polandtheplasmidpt7ireshbs.itonstratedthathbvspecifichumoralresponsenotonlycouldbeinduced,butalsouchstrongerthanthat

6、inducedbytheclassicaleukaryoticexpressionsystem.andthehbvspecificth2typeimmuneresponsecouldinducestrongerhumoralresponseinvivo.　　［key；geneimmunization；hbv　　基因免疫作为一种新的免疫接种手段自问世以来，已在抗感染免疫等方面取得了一系列较为满意的结果，其本质特征主要是将含编码目的基因的表达载体直接注射至机体局部，表达相应抗原，诱导机体产生特异性免疫应答。.cOm基因免疫的效果很大程

7、度上取决于外源基因在宿主细胞内的转录和表达水平。因此，可以通过选择高效表达系统的方式提高外源基因的表达水平，有效增强基因免疫的效果。　　基于t7rna聚合酶与t7强启动子ф10间识别的特异性和高效性而建立的共表达体系，为目前最强大原核表达系统之一［1］。本室已通过联合采用以真核启动子cmv调控t7rna聚合酶的表达和在t7启动子下游插入脑心肌炎病毒mrna的核糖体结合位点（ires）两种方案，组成pcmvt7pol/pt7ires双质粒共表达体系，成功实现了原核表达系统的真核化［2］。那么，这一真核化的原核表达系统与常规真核表达

8、质粒相比能否有效提高目的基因在真核细胞中的表达水平及增强基因免疫的效果呢？本研究中，我们拟以pcmvt7pol/pt7ireshbs双质粒共转染真核细胞株c2c12及以共注射方式基因免疫小鼠，并以常规真核表达质粒pcmvhbs为对照，探讨该真