金钗石斛生物碱和水溶性多糖的累积规律论文

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1、金钗石斛生物碱和水溶性多糖的累积规律论文杨立昌，项君，洪鲲，乙引，王亚筑，林俊清【摘要】目的探索金钗石斛体内生物碱和水溶性多糖累积规律。方法生物碱、水溶性多糖分别采用氯仿、乙醇提取并测定其吸光度。结果生物碱含量以思茅产最高，罗甸产最低，岩生基质高于树生基质.freelin，60℃烘干至恒重，粉碎，过60目筛。2.2生物碱含量测定参照金蓉鸾等3的方法。准确称取粗粉0.500g，置于150ml磨口平底烧瓶中，用5ml氨水湿润，密塞放置30min，加氯仿10.0ml，称重，置80℃水浴锅上回流提取2h，冷

2、却后称重，补充氯仿至原重，过滤。精确量取滤液1.0ml，用氯仿稀释至25ml，摇匀，取10ml于60ml分液漏斗中，加入pH4.5缓冲液5.0ml和0.04%溴甲酚绿1.0ml，剧烈振摇3min，静置30min，氯仿层用氯仿浸泡处理并干燥后的药棉过滤，取滤液6.0ml，加入0.01mol/LNaOH的无水乙醇液1.0ml，摇匀。于波长620nm处测得吸收度。以石斛碱作为内标绘制标准曲线。总生物碱含量(以石斛碱计，%)=(样品液吸收度×20μg×稀释倍数)/(标准品吸收度×样品重)×100%。2.3水

3、溶性多糖含量测定参照李满飞4、李合生5和陈毓荃6等的方法。称取金钗石斛粗粉0.100g，在索氏抽取器中用80%乙醇于78℃水浴锅上回流提取3h。将装有样品的滤纸包于105℃烘干，加40ml重蒸水，沸水浴提取3h，趁热过滤，收集滤液。合并滤液，定容至1000ml。精密吸取样液1ml，加苯酚试液0.5ml，摇匀，迅速滴加浓硫酸2.5ml，摇匀，静置5min，沸水浴15min，迅速冷却至室温，于490nm处测定吸光度。以葡萄糖作为标准绘制标准曲线。多糖的含量(%)=(从标准曲线查得糖的含量/测定用样品液的

4、体积)×提取液体积×稀释倍数/样品重量×106×100%。2.4统计分析将所得数据经EXCEL2003和SPSS15.0进行统计分析。3结果3.1产地对金钗石斛有效成分累积的影响不同地区生物碱和水溶性多糖含量因立地条件、气候的不同而有差异(表1)。结果显示，思茅产金钗石斛的生物碱含量最高，其干重和鲜重百分含量分别为0.5100%和0.0863%;罗甸产金钗石斛生物碱含量最低，其干重和鲜重中生物碱含量分别为0.2667%和0.0430%。由方差分析可看出，如果以干重计算，罗甸产金钗石斛的生物碱含量与赤

5、水、合江、思茅产金钗石斛生物碱含量存在极显著差异;如果以鲜重计算，则罗甸产与思茅产金钗石斛之间存在显著差异。表1不同产地金钗石斛生物碱、水溶性多糖含量3.2附生基质对金钗石斛有效成分累积的影响以贵州赤水产金钗石斛为实验材料，研究了附生于岩石和树干上的金钗石斛体内生物碱和水溶性多糖累积的影响(表2)。方差分析结果显示，虽然附生基质不影响金钗石斛体内生物碱的单位鲜重含量(F=4.200)，但是，却极显著影响生物碱的单位干重含量(F=52.364)。以干重计算，附生岩石和附生树上金钗石斛的生物碱百分干重分

6、别为0.4867%和0.4067%，前者为后者的1.2倍。同样，方差分析表明附生基质对金钗石斛体内水溶性多糖的累积过程没有显著影响。表2附生基质对金钗石斛有效成分累积的影响3.3栽培环境对金钗石斛有效成分累积的影响在温室中驯化栽培与野外栽培相比，前者具有方便、成本低、利于控制石斛生长条件的优势。但两种栽培环境下的有效成分含量才是决定何者更为科学，更有利于提高药用价值的标准。以贵州赤水产金钗石斛为实验材料，研究了野外栽培和温室栽培过程中的金钗石斛体内生物碱和水溶性多糖的累积(表3)。结果表明，栽培环境

7、显著影响水溶性多糖含量，但对生物碱累积没有显著影响。特别是以干重计算，野外和温室栽培条件下金钗石斛水溶性多糖含量分别为2.3250%和2.1067%，前者为后者的1.1%，存在极显著差异(F=42.735)。表3栽培环境对金钗石斛有效成分累积的影响3.4生长期对金钗石斛有效成分累积的影响不同生长期对赤水金钗石斛中的生物碱和水溶性多糖累积的影响见图1。结果显示，随着生长期的延长，生物碱逐渐积累，在3月龄金钗石斛体内生物碱含量只有0.09%，但在3年龄金钗石斛体内生物碱含量达到0.53%，两者相差5.9

8、倍。相反，金钗石斛体内水溶性多糖累积出现先增加后降低的趋势，在第1年基本达到饱和，在第2年达2.83%为最高值，但在3年龄金钗石斛体内水溶性多糖含量则降低到2.25%。4讨论生物碱和水溶性多糖是药材石斛的主要有效成分，它们在金钗石斛体内含量的高低直接影响到药材质量，因此，本文研究对于金钗石斛产地选择和规范化种植具有现实的指导意义。我们的研究表明，金钗石斛生物碱含量顺序为云南思茅贵州赤水四川合江贵州罗甸，而水溶性多糖含量则为贵州赤水云南思茅贵州罗甸四川合江(表1)，由此