黄芩苷对白色念珠菌酶活性的影响论文

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1、黄芩苷对白色念珠菌酶活性的影响论文【摘要】目的运用分光光度法检测黄芩苷作用白色念珠菌后,其琥珀酸脱氢酶（SDH）、细胞色素C氧化酶（CCO）、Ca2+-Mg2+-ATPase活性的改变，以探讨黄芩苷抗白色念珠菌作用靶位，为探索中药活性成分抗真菌作用机理提供依据。方法收集经黄芩苷作用了相应时间的白色念珠菌，制备菌悬液，反复冻融研磨，差速离心法提取白色念珠菌线粒体；Log/ml黄芩苷浓度组白色念珠菌SDH活力明显低于0mg/ml黄芩苷浓度组(P＜0.05).freelg/ml黄芩苷浓度组与0mg/ml黄芩苷浓度组比较，Ca2+

2、-Mg2+-ATPase活力差异显著，黄芩苷浓度越高，Ca2+-Mg2+-ATPase活力越低，作用时间对Ca2+-Mg2+-ATPase活力没有明显影响(P＞0.05)。结论①黄芩苷具有明显的抗白色念珠菌作用；②黄芩苷可降低白色念珠菌SDH酶活力；③黄芩苷对白色念珠菌CCO酶活力未见明显影响；④黄芩苷可降低白色念珠菌Ca2+-Mg2+-ATPas【关键词】黄芩苷白色念珠菌抗真菌Abstract:ObjectiveToinvestigatethetargetsiteofbaicalinagainstCandidaalbic

3、ansandsupplybaseforexploringantifungalactionmechanismofthetraditionalChinesemedicineactiveponentbydetectingtheeffectofbaicalinonsuccinatedehydrogenase,cytochrome-oxydase,Ca2+-Mg2+-ATPasethroughabsorptionspectrometry.MethodsAfterincubatede,Candidaalbicanses.Thenmit

4、ochordriaple.LoethodetryuchhigherthanthatofCandidaalbicanstreatedg/ml,0.5mg/ml,1mg/ml,ongthethreedoses.②Nodifferencee.③TheactivityofCa2+-Mg2+-ATPasedecreasedsignificantlyinbaicalingroupsechanism黄芩苷是古老中药黄芩的主要有效成分，药理作用广泛，不但具有抗炎、解热、镇静、降压、利尿、利胆、保肝以及调节免疫等作用［1～5］，而且具有良好

5、的抗真菌作用［6］。目前对黄芩苷的大部分研究集中在药效和药理实验方面，鲜见作用机制的研究报道；而探索黄芩苷的抗真菌作用机理,能够为这种传统中药的抗真菌作用提供可以量化的现代医学指标，有利于中药的高附加值开发及现代化、国际化进程，并为发现和研制更理想的抗真菌药物提供有益的线索和理论依据。本实验运用分光光度法，检测黄芩苷作用白色念珠菌后其琥珀酸脱氢酶（SDH）、细胞色素C氧化酶（CCO）、Ca2+-Mg2+-ATPase活性的变化，以探讨黄芩苷抗白色念珠菌作用靶位，为探索中药活性成分抗真菌作用机理提供依据。1材料与方法1.1材

6、料1.1.1菌株白色念珠菌标准株（22086），购自中国预防医学科学院。1.1.2试剂及仪器黄芩苷(江西省中医药研究所提供，纯度≥98%)；马心细胞色素C（Sigma公司）；牛血清白蛋白(Sigma公司);RPM11640粉(美国Gibco公司):琥珀酸脱氢酶（SDH）测试盒和超微量ATP酶测试盒（均购自南京建成生物工程研究所）；紫外分光光度计(上海分析仪器总厂);28RS型高速低温离心机(德国Heraeus公司);05PR-22型低速冷冻离心机(日立工机株式会社)。1.2方法1.2.1实验设计采用2因素4水平析因实验设计

7、，2因素为黄芩苷浓度、作用时间；黄芩苷浓度有0,0.25,0.5,.freelg/ml4水平，作用时间为6，12，24，48h四水平。1.2.2线粒体的分离取培养至对数生长期调整为一定浓度的白色念珠菌菌液，根据实验设计，分别加入相应浓度的黄芩苷，35℃培养相应时间后,无菌生理盐水洗涤2次，每次1000r/min离心5min。去上清，沉淀用无菌生理盐水混悬，调整浓度为1×107CFU/ml。菌液-15～-20℃冷冻，室温迅速融化并置于研钵中，研磨5～15min，如此反复冻融研磨3～5次，制成匀浆。取0.34mol/L的蔗糖溶

8、液4.5ml置干净离心管中，沿管壁缓缓加入4.5ml白色念珠菌匀浆覆盖于上层，2800r/min离心5min以去除细胞核、未破碎的细胞和大的膜碎片，上清移至另一干净离心管中，17000r/min离心15min，弃去上清，缓冲液重悬沉淀部分，即得线粒体样品。1.2.3蛋白质含量测定采用Lomol／L，pH