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1、免疫磁珠技术在肿瘤学领域的应用【摘要】免疫磁珠是免疫微球的一种,它是包被有单克隆抗体的球型磁性微粒,可特异性地与靶物质结合使之具有磁响应性,可以保证被分离靶细胞的形态和功能的完整,具有灵敏度高、特异性高、检测速度快、重复性好、操作简单和不需要昂贵的仪器设备等优点,本文就该技术应用于肿瘤细胞的分离、富集与检测以及肿瘤的生物学研究和磁导向治疗、免疫磁性净化等领域的研究进展作一综述。【关键词】免疫磁珠技术;循环肿瘤细胞;免疫磁性净化;综述 [Abstract]Immunomagicbeads,akindofimmunomagicmicrospheres,arethesphe
2、ricalmagicparticlescoatedonoclonalantibodies,aterialandgetmagicresponsivenessandensurethemorphologicalandfunctionalintegrityoftheseparatedtargetcells.Thehighersensitivityandspecificity,rapiddetection,entrequirementmakethistechniquemorepopular.Immunomagicbeadshavegraduallybeenappliedtothe
3、separation,enrichmentanddetectionoftumorcells,asorousbiologicalresearchandtargetedtherapy,immunomagicpurificationandotherfields. [Keymunomagicbeads;circulatingtumorcells;immunomagicpurification;reviemunomagicbead,IMB)技术是近年来国内外研究的一种新的免疫学技术。IMB是免疫微球的一种,为包被有单克隆抗体的球型磁性微粒,可特异性地与靶物质结合使之具有磁响应性
4、。该技术由JohnUgelstar等于1979年首先制备出,从此被广泛地应用于医学卫生领域的许多方面,并由此引发了生物分离技术上的一次革命。 1IMB技术的基本原理 IMB是一些以金属小颗粒为核心的微球,其外层可以根据需要包被不同的免疫活性物质(抗原、抗体等),使其结合样本中具有相应免疫配基的靶细胞;再利用磁场的作用把这些磁珠与靶细胞的复合体分离出来。IMB技术区别于PCR技术和流式细胞技术的一个最明显的优势在于,它可以保证被分离靶细胞的形态和功能的完整。免疫磁珠技术同时还具有灵敏度高、特异性高、检测速度快、重复性好、操作简单和不需要昂贵的仪器设备等优点。 用IM
5、B技术进行分离细胞有两种方式:直接从细胞混合液中分离出靶细胞的方法称为阳性分离;用IMB去除无关细胞使靶细胞得以纯化的方法称为阴性分离。 2肿瘤细胞的分离、富集与检测 肿瘤的转移和浸润是影响肿瘤患者预后的重要因素,易导致肿瘤的复发和转移,且早期即可发生,所以早期实体肿瘤也被认为是全身性疾病。IMB技术应用于肿瘤学可以确定临床分期、监测术后患者肿瘤复发与转移、评估预后、选择个体化的治疗策略。 基于IMB技术可以分离有活性特异细胞的基本原理,IMB技术广泛应用于肿瘤细胞的分离、富集与检测。根据肿瘤细胞不同的生物学特性,先将特异的抗体标记在磁珠上,通过肿瘤细胞特异性抗体
6、对肿瘤细胞表面抗原的特异识别,在磁场作用下达到分离细胞的目的。这样,肿瘤特异性抗原不仅被用来区分肿瘤细胞与正常细胞,还被用来将肿瘤细胞富集起来,大大增加了检测的敏感性。 分离肿瘤细胞的关键在于包被磁珠的特异性标记的选择。常用的肿瘤细胞的检测标记有细胞角蛋白、癌胚抗原、基质金属蛋白酶和端粒酶等。IMB特异性标记的选择直接关系到肿瘤细胞分离的灵敏度和特异性。阴性选择法利用IMB去除无关细胞从而使肿瘤细胞得以富集、纯化,主要的优点在于其不依赖肿瘤细胞表达特异性标记。 IMB在肿瘤细胞分离中的应用主要表现在以下几个方面： 2.1外周血中肿瘤细胞的检测 大量证据表明,原发
7、肿瘤在早期就有肿瘤细胞脱落到循环系统,这些脱落的肿瘤细胞是常用的检测手段很难检测到的,被称为循环肿瘤细胞(circulatingtumorcell,CTC)、外周血微转移等。肿瘤治疗失败的主要原因就在于不能早期发现并控制患者体内存在的播散性的微小转移。袁捷等[1]在32例胃癌患者的外周血中发现有13例可以检出微量的胃癌细胞,且与胃癌的浸润深度、有无区域淋巴结转移和有无远处转移相关,提示外周血微转移与胃癌的进展过程相一致,可能是胃癌进展与转移的早期行为。 Nakamura等[2]通过IMB技术检测了循环血液中的食管癌细胞。他们采用了Ber
