nyt 554-2002 鸭病毒性肝炎诊断技术

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1、ICS11.220B41中华人民共和国农业行业标准NY/T554-2002鸭病毒性肝炎诊断技术Diagnostictechniquesforduckviralhepatitis2002一08一27发布2002一12一01实施中华人民共和国农业部发布427NY/T554-2002前言鸭病毒性肝炎(duckviralhepatitis，简称DVH)是雏鸭的一种急性接触传染性疾病，以肝炎为主要特征，世界动物卫生组织[WorldOrganizationforAnimalHealth(英),OfficeIntentionaldesEpizootic(法),OIE〕把该病列

2、为B类疫病，我国农业部列为二类疫病。DVH的病原为鸭肝炎病毒(DHV)，根据病毒的特性不同，DHV分为3种类型(DHV=DHV=DHV,)。最常见的为DHV,属肠道病毒(我国仅有此型);DHV:为星状病毒;DHV，为小核糖核酸病毒。本标准规定的雏鸭接种/保护试验和鸭(鸡)胚接种/中和试验与OIE推荐的相应方法一致。本标准由农业部畜牧兽医局提出。本标准由全国动物检疫标准化技术委员会归口。本标准起草单位:华南农业大学、江苏省农业科学院.本标准主要起草人:贺东生、黄引贤、张则斌、罗函禄、刘福安。NY/T554-2002鸭病毒性肝炎诊断技术1范围本标准规定了鸭病毒性肝炎

3、的雏鸭接种/保护试验和鸭(鸡)胚接种/中和试验的技术要求。本标准适用于鸭病毒性肝炎的诊断及检疫。2雏鸭接种/保护试验2-，材料准备2.1.1研钵或平皿，玻璃匀浆器，拍MI，带胶塞玻璃瓶。2.1.21ml和5MI注射器及针头。2.1.30.22ym微孔滤膜及滤头。2.1.4离心管、手术剪刀和手术镊子。2.1.50.85%生理盐水:在使用前加人育霉素和链霉素，使其最终浓度分别为2000IU/ml和2000pg/mL,2.1.6DHV高免血清(在国内诊断检疫仅用DHV，对进境鸭的检疫还应加上DHV,,DHV:抗血清)。2.1.7雏鸭:1-5日龄75只易感健康雏鸭。2.

4、2操作方法2.2，病料处理在无菌室内超净台上无菌采取数例病鸭的肝脏组织log，于研钵或平皿中剪碎，用玻璃匀浆器制备组织匀浆，按1，10(W/V)加人生理盐水。将匀浆液转至离心管中，3000r/min离心10min。弃去上层脂肪，抽取中间清亮的液体，再经过0.22pm的灭菌微孔滤膜过滤，收集滤过的液体，作为病料样品直接接种;或装人10mL玻璃瓶中，盖上胶塞，置专用的密闭铁盒里，于一20℃保存待检，保存期不超过1年。2.2.2试验选取75只健康雏鸭，分为A,B和c三组，每组25只，做如下处理:A组(攻毒保护组):每只鸭颈背部皮下注射1mI.DHV高免血清。24h后，

5、每只鸭皮下注射0.2mL的待检样品。B组(攻毒组):每只鸭颈背部皮下注射0.2mL的待检样品。c组(对照组):每只鸭颈背部皮下注射0.2mL的生理盐水。将上述三组鸭置于相同的管理条件下，隔离饲养，连续观察。2.3结果判定当c组没有任何一只雏鸭死亡时，对照试验才成立，可进行如下判定，否则应重检。阳性(});B组特征性死亡”的鸭只总数达30%以上(含3000)，而A组死亡的鸭只总数低于10%(含100a)o可疑(士):B组特征性死亡的鸭只总数低于30%，而A组的鸭只不死亡。此可疑结果应重检，仍为可疑时则判为阳性。1)特征性死亡指死亡的胚胎出现如下任何一种病变尿囊液变

6、绿、肝脏肿大、肝有出血斑点或有坏死灶。NY/T554-2002阴性(一):B组的鸭只均不死亡。3鸭(鸡)胚接种/中和试验I，材料准备3.1.11ml注射器及针头4套。3.1.2生理盐水:在使用前加入青霉素和链霉素，使其最终浓度分别为2000IU/ml和2000Wg/m工。3.1.3DHV高免血清。3门.4鸭(鸡)胚:75枚12^14日龄的易感健康鸭胚;也可选用9-10日龄的无特定病原(SPF)鸡胚。3.2操作方法3.2门取。.5mL病料样品，加人4.5mL的生理盐水，制备成10。倍稀释的待检病毒液。3.2.2选取75只鸭或鸡胚，分为A,B和c共三组，每组25只胚

7、，处理如下:A组(中和试验组):取2mL高免血清和2ml，的待检病毒液，混合均匀。置于37"C温箱中作用30min后，每胚经尿囊腔接种。.2ml-.B组(接种试验组):取2ml的生理盐水，加人2mL待检病毒液，混匀，每只胚经尿囊腔接种0.2mLc组，对照组:每只胚经尿囊腔接种0.2mL的生理盐水。将上述三组接种的鸭(鸡)胚用石蜡或无菌胶布封口后，置于370C孵化箱内继续孵化，每天照蛋2次，剔除接种后24h内A,B,C三组因细菌污染而死亡的胚，分组记录其死亡情况及胚胎剖检病变。观察至第7d(如用鸡胚，则为10d),3.3结果判定当c组中没有任何胚胎死亡，才可进行如

8、下判定，否则应重检。阳性