山西省蔬菜斑潜蝇发生的调查及快速鉴定

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1、山西省蔬菜斑潜蝇发生的调查及快速鉴定摘要：对山西省蔬菜斑潜蝇的发生进行了调查，并通过对线粒体DNA（mtDNA）的COI基因序列的扩增与测序，运用最大简约法构建系统树，对斑潜蝇属的3个种18个样本进行了快速鉴定。此方法为快速准确地鉴定提供了一个新的参考途径。关键词：斑潜蝇；系统树；快速鉴定中图分类号：Q969.44文献标识码：ADOI编码：10.3969/j.issn.1006-6500.2014.10.022SurveyonLiriomyzainShanxiandItsRapidIdentificationKANGYu-gu

2、ang，QINZhuo（ShuozhouVocationalTechnologySchool，Shuozhou，Shanxi036002，China）Abstract：ThedistributionofLiriomyzainShanxiwasinvestigated，and18samplesof3speciesinthegenusLiriomyzahadbeensequencedtoobtainthedataofmtDNACOIsequencesforitsidentities.Combiningbothourdataandt

3、hosefromGenbank，phylogenetictreeswithmostparsimonywereconstructed.Themethodishelpfulforrapid9identification.Keywords：Liriomyza；phylogenetictrees；rapididentification斑潜蝇属潜蝇科（Agromyzidae），斑潜蝇属（Liriomyza），全世界已知300多种，主要分布于温带地区。绝大多数种类以潜叶方式取食危害植物，其中具有重要经济意义的种类是多食性种类，有10余种，

4、但危害严重的有4种[1-3]，分别为：美洲斑潜蝇（LiriomyzasativaeBlanchard）、南美斑潜蝇（LiriomyzahuidobrensisBlanchard）、三叶草斑潜蝇（LiriomyzatrifoliiBurgess）和番茄斑潜蝇（LiriomyzabryoniaeKaltenbach）。其寄主范围可达14～29科的上百种植物[4-6]，是世界上许多国家和地区蔬菜、瓜类、花卉、烟草及某些中药材的重要害虫，有些种类是世界公认的检疫害虫[5，7]。1材料和方法1.1材料在山西省太原、临汾、五台山的菜田，对

5、14种寄主植物进行调查。从田间采回带有潜叶蝇幼虫或蛹的寄主叶片，将其放入一次性塑料杯中，用纸巾将口封住并用橡皮筋扎紧，置于室内养虫箱中饲养，温度控制在（25±1）℃之间，相对湿度在60%～80%之间，让其化蛹、羽化。待羽化249h后，用细毛笔蘸100%的酒精，将已羽化的潜蝇成虫收集到IMEC管中，并用100%的酒精浸泡，放置于-20℃的冰柜中保存，待用。1.2鉴定方法1.2.1形态鉴定将浸泡在100%酒精中的样本取出，根据成虫形态特征（中鬃排列行数、前翅翅脉形状、体长、体型、体色）、取食习性和幼虫体色、后气门突开口数、化蛹部位

6、、化蛹方式、蛹的颜色等来判定。1.2.2快速鉴定利用通用引物C1-J-1535（5’-ATTGGAACTTTATATTTTATATTTGG-3’）和TL2-N-3014（3’-TCCATTGCACTAATCTGCCATATTA-5’）对线粒体COI基因进行PCR扩增，将扩增产物纯化并测序，最后对测序结果进行校对和拼接，利用网络同源序列搜索引擎BLAST对GenBank中的同源序列进行比较，通过该基因片段确定所属种类。1.3数据分析本研究中的物种鉴别特别重视形态学与DNA信息的结合。鉴别包括了可验证的下列步骤：（1）初步鉴别到物

7、种，并选定测序样本；（2）在不告知物种信息的前提下测序，并将序列与公共数据库进行比较，找到该序列最近的类群；（3）分类学家和分析人员对结果进行比较、相互验证；（4）得出最终的分类鉴别结论。9DNA分类学的基本流程如下：从所获取的个体上得到组织样品，然后进行DNA提取；将得到的DNA作为后续研究的样品，通过扩增，得到用于基因测序的一个或数个基因片段；而结果得到的基因序列将成为最初的一个鉴定标记，用于判断样品所取个体的物种属性。这样的序列将被整合到合适的数据库中。序列和标本及相应的DNA作为以后工作的参考标准，会被储藏到标本馆（或

8、博物馆）中。一旦一个重要序列的数据库构建完成，新的样品将会与现存序列进行比对从而完成物种的再次鉴定或判断一个新的物种描述是否合理。数据库还可以用来解决一些问题。2结果与分析2.1发生调查通过在山西省太原、临汾、五台山等地的调查，发现在山西蔬菜田主要有3种斑潜蝇，它们分别是：美