头孢孟多酯钠无菌检查方法的探讨

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1、头孢孟多酯钠无菌检查方法的探讨[摘要]目的：根据中国药典2010年版无菌检查法的相关规定，通过一系列试验，建立头孢孟多酯钠无菌检查法。方法：使用规定各种试验菌，同时使用β-内酰胺酶进行试验。结果：头孢孟多酯钠采用薄膜过滤法进行无菌检查，对金黄色葡萄球菌有较强的抑菌活性。结论：头孢孟多酯钠无菌检查需加入β-内酰胺酶来消除抑菌活性，以保证其无菌检查的准确性。[关键词]头孢孟多酯钠；抑菌性；β-内酰胺酶；无菌检查中图分类号：R文献标识码：A文章编号：1009-914X（2014）46-0098-01中国药典明确规定建立药品的无菌检查法时，应进行方学的验证。本文通过对

2、头孢孟多酯钠进行每一株试验菌的验证，证明所采用的方法有效的去除了其抑菌活性，可用于该药品的无菌检查。一.试验材料与仪器1.供试品：头孢孟多酯钠（批号为：A201202001、A201202002、A201202003）哈药集团制药总厂生产52.培养基：硫乙醇酸盐流体培养基、营养肉汤培养基、改良马丁培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、营养琼脂培养基均由北京陆桥技术有限责任公司提供3.验证试验用菌种名称及编号：由中检所提供金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26003]；枯草芽孢杆菌[CMCC（B）63501]；大肠埃希菌[CMCC（B）44102]；生孢梭菌[CMCC（B）6

3、4941]；白色念珠菌[CMCC（F）98001]；黑曲霉[CMCC（F）98003]。4.β-内酰胺酶（酶活力不低于300万单位/ml）：由张家口市格瑞生物化学科技有限公司提供5.全封闭集菌器：型号KSF330杭州高得泰林责任技术有限公司提供二、试验准备：1.菌液的制备及菌液计数：1.1接种少许枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌的培养物到营养肉汤培养基中，接种生孢梭菌的培养物少许到硫乙醇酸盐流体培养基中，上述均在30-35℃的温度下培养18～24小时后备用。分别取上述各培养物1ml，加入到9ml氯化钠注射液中，分别10倍梯度稀释至约10-

4、5～10-7之间，混匀备用。51.2取白色念珠菌少许的培养物接种到改良马丁培养基中，在23～28℃的温度下培养48小时后，取该培养物1ml，用氯化钠注射液10倍梯度稀释至约10-5，混匀备用。1.3取培养好的黑曲霉斜面培养物，加入3～5ml含0.05%（ml/ml）吐温80的0.9%氯化钠注射液，将孢子洗脱。然后用管底部有圆孔并带有薄的无菌棉花的无菌试管滤出孢子悬液至无菌空试管中，再梯度稀释，制成含菌数每1ml小于100cfu孢子悬液，混匀备用。1.2菌液计数：分别取上述配制好的4种细菌和2种真菌，菌液1m加入培养皿，每种菌液做平行2皿，注入相应琼脂培养基15

5、～20ml。真菌在23～28℃的温度下培养72小时，细菌在30～35℃的温度下培养48小时；。3.判断标准：每1ml菌液中含菌量小于100CFU。4.试验记录：见表1。三.试验操作：2.1供试液制备：取头孢孟多酯钠10克，分别将其溶解并转移至500ml0.9%氯化钠注射液溶液中，制成约20mg/ml的供试溶液1份，摇匀；同法制备头孢孟多酯钠供试液每批数份，备用。2.2薄膜过滤：52.2.1取一三筒全封闭集菌器，先用少量0.1%蛋白胨溶液润洗滤膜后，将上述其中1份供试液按薄膜过滤法平行过滤，过滤后，每筒分别用0.1%蛋白胨水溶液冲洗，冲洗3次，每次100ml，每

6、次冲洗前应充分振摇。冲洗液过滤后，三筒均注入100ml硫乙醇酸盐流体培养基，并向每筒培养基中加入1mlβ-内酰胺酶。其中一筒不加菌液，作为本次试验的供试品对照，供试品对照应无菌生长；另外两个筒，一个筒加入上述1.1中制备好的大肠埃希菌1ml，一个筒加入金黄色葡萄球菌1ml，用同样的方法操作，共做3组，6种试验菌及相应培养基逐一进行验证，将所有培养基筒置规定条件下培养观察。2.2.2对照组：另取一全封闭集菌器，不过滤供试品和冲洗液，直接注入100ml相应培养基，并加入上述1.1中制备好的6种菌液各1ml，作为对照。将所有培养基筒置规定条件下培养观察。2.2.3阴

7、性对照组：再取一个相同的培养器，各过滤冲洗用0.1%蛋白胨水溶液300ml后，再分别加入改良马丁培养基和硫乙醇酸盐流体培养基各100ml，并分别向每筒培养基中注入1ml的β-内酰胺酶，作为阴性对照。2.3培养：硫乙醇酸盐流体培养基筒在30-35℃的温度下培养3天；改良马丁培养基筒在23-28℃的温度下培养5天，且每天要观察并记录结果。2.4判断标准：a.对照组培养48～72小时应生长良好。5b.与对照组比较，含供试品各容器中的试验菌均生长良好。c.阴性对照组及供试品对照组培养5天，均应无菌生长。四、讨论药品无菌检查是否准确的关键是试验中对其抑菌性的有效消除，通

8、过试验可以得出头孢孟多酯钠采用如下条件