多管发酵法步骤和材料清单

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1、多管发酵法测定大肠杆菌一、实验器材及药品：序号实验用品（按取2个水样）数量1)试管（带试管塞）40支2)小倒管35个3)试管架2个4)10ml量筒1个5)10ml移液管2个6)吸耳球2个7)1ml移液管8个8)接种环1个9)酒精灯1个10)恒温箱1个11)蛋白胨培养液1瓶12)EC培养液1瓶13)电炉1个14)500ml烧杯4个15)玻璃棒（搅拌用）2个16)取样瓶2个17)标签纸和记号笔1个18)电子天平，取样勺1个19)高压灭菌锅1个20)蒸馏水1桶21)洗瓶1个22)冰箱（如果水样和培养基不用长时间放置，可以不用）1个23)恒温

2、水浴锅1个24)其它实验辅材若干一、实验步骤2.1水样接种量将水样充分混匀后，根据水样污染的程度确定水样接种量。每个样品至少用三个不同的水样量接种。同一接种水样量要有五管。相对未受污染的水样接种量为10mL、1mL、0.1mL。受污染水样接种量根据污染程度接种1mL、0.1mL、0.01mL或0.1mL、0.01mL、0.001mL等。使用的水样量可参考下表1。表1接种用水量参考表 如接种体积为10ml则试管内应装有三倍浓度乳糖蛋白胨培养液5ml;如接种量为1ml或少于1ml，则可接种于普通浓度的乳糖蛋白胨培养液10mL中。2.2初发

3、酵试验将水样分别接种到盛有乳糖蛋白胨培养液的发酵管中。在37℃±0.5℃下培养24h±2h。产酸和产气的发酵管表明试验阳性。如在倒管内产气不明显，可轻拍试管，有小气泡升起的为阳性。2.3复发酵试验轻微振荡初发酵试验阳性结果的发酵管，用3mm接种环或灭菌棒将培养物转接到EC培养液中。在44.5℃±0.5℃温度下培养24h±2h（水浴箱的水面应高于试管中培养基液面）。接种后所有发酵管必须在30min内放进水浴中。培养后立即观察，发酵管产气则证实为粪大肠菌群阳性。二、结果的计算根据不同接种量的发酵管所出现阳性结果的数目，从表2或表3中查得每

4、升水样中的粪大肠菌群。接种水样为100mL2份、10mL10份、总量300mL时，查表2可得每升水样中的粪大肠菌群；接种5份10mL水样、5份1mL水样、5份0.1mL水样时，查表3求得MPN指数，MPN值再乘10，即为1L水样中的粪大肠菌群。如果接种的水样不是10mL、1mL和0.1mL，而是较低的或较高的三个浓度的水样量，也可查表3求得MPN值，再经下式计算成每100mL的MPN值。附：（两种培养基也可以直接购买）单倍乳糖蛋白胨培养液成分；10g蛋白胨，3g牛肉浸膏，5g乳糖，5g氯化钠，1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1ml，1000m

5、l蒸馏水。配置时调节pH：7.2—7.4EC培养液成分：20g胰胨，5g乳糖，1.5g胆盐三号，4g磷酸氢二钾，1.5g磷酸二氢钾，5g氯化钠，1000ml蒸馏水。灭菌后pH为6.9.