河南博士后项目启动经费资助

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1、河南省博士后项目启动经费资助总结报告姓　　名　　　宇文延青　　　　编　　号　　　2012059　　　　　所在设站单位　　河南师范大学　　　　项目名称日本三角涡虫(Dugesiajaponica)成体干细胞的分离纯化及在损伤修复中作用资助金额　3万元填报日期　　20140526　　　　河南省博士后管理委员会办公室制资助经费使用情况开支项目名称金额备注仪器设备使用费5,000元试验用材料费17,500元测试费3,500元差旅费2,500元科研管理费1,500合计：30,000元余额：0元本研究项目其它经费来源情况经费来源金额合计：剩余资金

2、以及用资助金购买的仪哭设备、图书资料等物品的处理情况剩余资助金或物品名称留给设站单位带走□□□□□□□□资助金在科研工作中起到的作用弥补了课题研究过程中经费的不足，充足的资助金保障了研究工作的顺利进行。研究工作总结1．主要研究内容、研究方法及研究成果：1.1主要研究内容日本三角涡虫（Dugesiajaponica）具有极强的再生能力，是动物再生机制研究的优良的模式动物，而neoblast细胞是D,japonica体内唯一具有增殖能力的全能干细胞，是其再生的生物学基础。本项目的研究内容主要包括以下三个方面：（1）采用机械切割与胰蛋白酶消

3、化相结合的方法，建立D.japonica的组织分散方法，并研究neobalst的分离纯化方法；（2）采用SMARTRACE方法克隆neoblast细胞的标志基因，为neoblast标记奠定基础；（3）在分离neoblast的基础上，通过体外培养技术和移植技术研究neoblasts对D.japonica再生能力的影响。1.2研究方法（1）组织分散方法D.japonica组织分散主要采用机械切割与胰蛋白消化相结合的方法，采用正交设计对影响胰蛋白酶消化效果的主要因素——温度、时间和胰酶浓度进行筛选，以细胞分散较好、细胞结构完整和细胞损失较少

4、为标准，筛选出最佳消化温度、时间及胰酶尝试，初步建立D,japonica组织分散方法。（2）标志基因克隆方法标志基因克隆主要采用同源克隆方法：首先在GenBank上搜索和下载全能干细胞的标志基因，在用生物学软件对序列进行同源性分析的基础上，设计简并引物克隆该基因的保守区，然后用SMARTRACE方法扩增其全长。（3）Neoblast功能研究主要采用体外培养和移植技术进行研究。通过辐射技术清除D.japonica体内的neoblasts，再将体外分离培养的neoblasts植入处理的D.japonica体内，研究neoblasts对D.

5、japonica再生能力的影响。1.3研究成果（1）初步建立的D.japonica的组织分散方法，具体方法如下：以0.25%胰酶（pH=7.4）按5:1（体积比）加入待消化组织，在20℃水浴条件下消化15min，然后以4℃、1000rpm离心3min收集分散细胞；（2）成功克隆neoblast细胞标志基因pumilio，并进行了深入的生物学分析。（3）发表相关研究论文（SCI）2篇。*YuwenY.Q,DongZ.M.,SiX.H.&ChenG.W*.2014.ApumiliohomologinPolycelissp.Developm

6、entGenesEvolution,224(1):53-56.*DongZ.M.,YuwenY.Q.,WangQ.H.,ChenG.W*.&LiuD.Z.2012.EightgenesexpressionpatternsduringvisualsystemregenerationinDugesiajaponica.GeneExpressionPatterns.12(1-2):1-6.2．研究成果的科学意义、应用前景、推广开发价值、以及经济和社会效益：近年来，胚胎干细胞（EScells）和诱导多能干细胞（InducedPluripote

7、ntStemCells,iPS）被广泛用于医疗，但二者的缺点是：（1）分化过程必须在体外完成；（2）移植细胞中不能含有多能干细胞，以防止畸胎瘤的形成。克服这些问题较理想的策略是促进机体固有的成体干细胞在体内的再生过程，这就需要对干细胞在体内的生物学特性进行研究，这种研究在哺乳动物模型上进行比较困难，而D.japonica是成体干细胞的体内生物学研究的理想替代模型，而建立neoblasts的高效分离与纯化方法，对其的体外生物学开展深入研究，是对其体内生物学研究的基础，因此D.japonica的neoblasts分离纯化技术的研究必将促进

8、成体干细胞的体内生物学研究。研究表明，neoblasts是D.japonica再生的生物学基础，因此对neoblasts的分离纯化及体外培养为进一步深入了解其生物学特性奠定了坚实的基础，并推动以neoblasts为基础的