淋巴细胞亚群功能状态的影响〔1〕

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1、淋巴细胞亚群功能状态的影响〔1〕【关键词】黄芪注射液银屑病Th细胞亚群IFNγIL4EffectsofAstragulusinjectiononThcellsubsetfunctioninpatientsphocytesfrom20patientsissionstageulatedagalutinin(PHA)(patientcontrolgroup)orPHAtogetherplesfrom10healthypeoplestimulatedalcontrolgroup.Thelevelsofinterferonγ(IFNγ)andinterleuiki

2、n4(IL4)inthesuper〔1〕本课题为山西省青年科技研究基金资助项目(课题编号：20011030)。natantsoflymphocytesarkedlylootedisvertingtoTh2cellsubset，thereforshoportontsignificanceintreatingpsoriasis.Keya公司)，黄芪注射液(每支10mL相当于原药材20g，正大青春宝公司)，人IFNγ、IL4定量ELISA试剂盒(北京邦定生物医学公司)，自动化板式酶标仪(ZS—CF5000型中国航天工业总公司)，水平式离心机(LDZ5－2型北京

3、医用离心机厂)，倒置显微镜(Olympus公司)，CO2培养箱(美国AshevilleNC)。1.3方法1.3.1淋巴细胞分离与培养分别取三组外周静脉血10mL，肝素抗凝对倍稀释后，以2∶1比例轻轻加入淋巴细胞分离液上，以2000r/min，离心15min，吸取单个核细胞层，经吸附法获得淋巴细胞，Hank′s液洗涤2次，将洗好的细胞用RPMI1640培养液配成2×107/mL的细胞悬液，取健康人上述细胞悬液200μL加入1.8mL含10％胎牛血清的RPMl1640培养液中，植入无菌培养板，设为正常对照组；取患者上述细胞悬液400μL，均分2份，各200μL如上加入

4、1.8mL含10％胎牛血清的RPMI1640培养液中，植入无菌培养板，1份设为病例未加药组；另1份加入黄芪注射液，终浓度为1mg/mL，设为病例黄芪组。以上各组中均加入PHA体外诱导淋巴细胞，终浓度5mg/mL。将培养板置37℃，含5％CO2的孵育箱中，用倒置显微镜观察细胞的生长状况，培养48h，收集培养上清液500μL，－20℃冻存备用。1.3.2细胞因子检测培养上清液中IFNγ与IL4水平采用双抗体夹心法定量ELISA试剂盒检测，操作严格按照试剂盒说明书进行，最后在自动化CF5000板酶标上测定OD492值(此型酶标仪可直接报告标本的浓度值)。1.4统计

5、学方法采用SPSS10.0统计软件包进行分析，所测的实验数据采用±s表示，组间差异用t检验，P＜0.05有统计学意义。2.2病例黄芪组和病例对照组IFNY与IL4比较(见表1)经黄芪注射液刺激后，病例黄芪组IFNγ水平明显低于病例对照组P＜0.05，而IL4水平明显高于病例对照组(P＜0.05)差异具有统计学意义。表13组T淋巴细胞培养上清液IFNγ、IL4水平比较3讨论CD4阳性T辅助淋巴细胞(简称Th)为一多功能细胞群体，在调节免疫系统中具有双重作用，对免疫反应的启动、最终表现形式和强弱起着关键作用。根据细胞因子分泌模式，CD4＋T细胞可分为Th1

6、和Th2亚群，它们来自一个共同的前体细胞Th0，Th1和Th2是由Th0发育而来的两种极化形式，Th1/Th2漂移需中间形式Th0的过渡。Th1细胞主要与细胞免疫介导的炎症反应有关，Th2细胞主要与体液免疫有关，二者同时还有相互抑制的作用。Th1细胞可分泌IL2、TNFα、IFNγ等，其中最主要的细胞因子是IFNγ，IFNγ可以活化巨噬细胞，刺激吞噬活性增强，是银屑病病理生理学变化过程中重要病因之一。Th2细胞主要分泌IL4、IL10等，可抑制巨噬细胞的活化，从而抑制Th1细胞，对自身免疫性疾病有很强的保护作用［4］。IL4是促进Th0向Th2分化

7、的主要因素，它主要通过活化STAT6蛋白促进Th2分化，STAT6基因敲除的小鼠则Th2细胞分化受损［5］，由此可见，在Th1/Th2平衡中，IFNγ主要促进Th1的分泌，IL4主要促进Th2的分化。故本研究选择IFNγ、IL4作为检测指标来评价Th1与Th2功能状态。正常机体内，Th1/Th2维持着动态平衡。当Th1/Th2失调时，则表现为Th1或Th2细胞中某一亚群功能增强，另一亚群功能减弱，可导致肿瘤、感染、自身免疫性疾病及移植排斥反应。一般而言，Th1反应过度活化可导致器官特异性自身免疫性疾病，如1型糖尿病、自身免疫性甲状腺炎、类风湿关节炎等；Th

8、2反应过度