石河子大学动物医学专业学士学位论文

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1、石河子大学动物科技学院本科毕业论文垦区猪肺炎支原体P97基因的检测院（系）：动物科技学院专业：动物医学学号：姓名：指导教师：（副教授）新疆石河子2014.6摘要为了解石河子垦区猪肺炎支原体P97基因的遗传变异情况，采集石河子部分规模化猪场的猪支原体肺炎疑似病料，采用PCR方法对疑似病料进行了黏附基因P97的检测，将PCR产物测序并与Genbank已登录的标准菌株序列进行同源性分析。结果显示：75份病变肺脏中，阳性病料43份，阳性率为57.33%（43/75），P97基因序列与参考菌株的同源性为98.4%～99.2%。检测结果表明石河

2、子垦区猪支原体肺炎的感染情况比较严重，猪肺炎支原体流行株与国际标准菌株有很高的同源性。关键词：猪肺炎支原体；P97基因；PCR检测AbstractThecurrentsituationofprevalenceofMycoplasmahyopneumoniae(Mhp)anditscorrespondinggeneticvariationsofP97geneinsomelarge-scaledpigfarmsinthereclamationareaofShiheziwasmeasured.SuspiciousMhpsampleswer

3、ecollectedanddetectedthatPCR(polymerasechainreaction)methodwasutilizedtodetecttheP97whichisaadhesingeneofthepositiveMhpsamplesandtheobtainedgenesequencesofclinicsampleswerecomparedwiththestandardstrainssequenceintheGenbankviahomologyanalysis.Theresultsshowthattheratioo

4、fpositivesamplesinallthedetectedsuspiciousMhplungsamplesis57.33%(43/75)andthegenetichomologyofthedetectedP97genesequencestothestandardstrainssequenceis98.4%~99.2%.OurdetectionresultsindicatethattheprevalenceofMhpinthereclamationareaofShihezianditssurroundingareasisseve

5、reandlocalepidemicMhpstrainshavehighhomologywithinternationalstandards.Keywords:Mycoplasmahyopneumoniae;P97gene;PCRdetectionI目录1材料与方法11.1材料11.1.1样品来源11.1.2主要试剂11.1.3主要仪器11.2方法21.2.1病料组织DNA的提取21.2.2阳性对照菌株DNA的提取21.2.3引物设计21.2.3PCR扩增体系31.2.4PCR反应参数31.2.5PCR产物的检测31.2.6基因序列

6、的测定与比对32结果与分析32.1病变组织中P36基因PCR检测结果32.2P97基因的扩增结果42.3产物序列分析43讨论5参考文献6致谢7I石河子大学动物科技学院动物医学专业学士学位论文垦区猪肺炎支原体P97基因的检测猪肺炎支原体（Mycoplasmahyopneumoniae，Mhp）是猪支原体肺炎（Mycoplasmalpneumoniaofswine，MPS）的主要病原。猪支原体肺炎是一种慢性、接触性传染病，具有高发病率和低病死率的特点[1]，被认为是拉开肺脏感染其它病原体序幕的一个重要的因素。据杨俊杰等[2]对新疆北疆地

7、区规模化猪场进行的血清学调查结果显示：猪肺炎支原体的感染情况比较严重。而目前针对北疆地区Mhp流行株的基因分子遗传信息等方面的研究报道很少，流行株的来源和变异基本情况本底不清，使该病的免疫预防工作带有很大的盲目性。为此，本实验采用PCR方法，检测了来自石河子垦区的75份具有呼吸道病症状的病肺中的Mhp的特异性基因P36[3]，将检测到Mhp阳性病料，进行了黏附基因P97的检测，并对P97基因的PCR产物进行了序列同源性比对，以期为垦区MPS的诊断和防控提供依据。1材料与方法1.1材料1.1.1样品来源无菌采集垦区部分规模化猪场具有呼

8、吸道病症状的病变肺脏，共75份，放入-20℃冰箱待检。1.1.2主要试剂阳性对照菌株：从南京天邦生物科技有限公司生产的猪支原体肺炎克隆弱毒活疫苗(支必宁)中分离的168株。离心柱型动物细胞基因组DNA提取试剂盒，购自北京鼎国昌盛生物技