invitrogen_trizol_中文说明书

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1、®TRIZOLReagentCat.No.15596-026Size:100mlStoreat2to8°C.警告：在与皮肤接触及吞咽有毒。可导致烧伤。与皮肤接触后，应立即用洗涤剂和大量水冲洗。如感到身体不适，应就医（如需要，应出示本产品标签）。本产品含有苯酚（108-95-2）和其他成分（NJTSRN80100437-5000P）。已经证明TRIZOL在室温下可稳定保存12个月。不过，我们建议在储存于2-8°C，以保证最佳性能。描述：TRIzol试剂（美国专利号，5346994）是即用型细胞和组织总RNA提取试剂。该试剂是一步法苯酚和异硫氰酸胍解决

2、方案，是对Chomczynski和Sacchi开发的单步RNA提取法（1）的改善。在匀质化或溶解样品中，TRIzol试剂可保持RNA的完整性，同时能破坏细胞及溶解细胞成分。加入氯仿离心后，裂解液分离成水相和有机相。RNA存在于水相。水相转移后，RNA通过异丙醇沉淀回收。移去水相后，样品中DNA和蛋白质可通过相继沉淀回收（2）。用乙醇沉淀可从中间相得到DNA，加入异丙醇沉淀可从有机相得到蛋白质（2）。与DNA的共纯化可能对不同样品得到的RNA的归一化有用。此技术可完美应用于少量人类、动物、植物或细菌来源的组织（50-100毫克）和细胞67（5×10）

3、，以及大量的组织（≥1g）和细胞（>10）。该TRIzol试剂方法简单，允许大量样本同时处理。整个过程可在一小时内完成。用TRIZOL提取总RNA可避免蛋白质和DNA污染。可用于Northernblot分析、斑点杂交、poly（A）+选择、体外翻译、RNA酶保护分析和分子克隆。聚合酶链反应（PCR反应）中，当两条引物位于单个外显子时，推荐使用扩增级DNA酶I(Cat.No.18068)处理分离出的RNA。TRIzol试剂方便提取不同种类、不同分子大小的RNA。例如，从大鼠肝中提取RNA，经琼脂糖凝胶电泳和溴化乙锭染色，高分子量RNA离散带其长度可高

4、达7kb和15kb，(组成mRNA’s和hnRNA’s)，两个主要的核糖体RNA带在~5kB（28S）和~2Kb（18S）。低分子量RNA介于0.1和0.3kB之间（tRNA，5S）。分离出的RNA用TE稀释，其A260/A280比值≥1.8。防止RNA酶污染的注意事项通过不当的技术操作，RNA酶可在任何提取程序中意外引入RNA的制备中。由于酶的活性难以抑制，所以必须防止其引入。进行RNA工作时，下列准则应予以遵守。•总是戴着手套。皮肤上通常包含的细菌和霉菌，可污染RNA的制备，同时也是RNA酶的一个来源。良好的微生物操作技术可防止微生物污染。•使

5、用无菌制品，专为RNA工作准备的一次性塑料器皿和自动吸管可以避免与共用设备的RNA酶交叉污染。例如，一个实验室正在使用的RNA探针可能用得上RNA酶A或RNA酶T1以减少过滤背景，其中任何非一次性物品（如自动吸管）可能是大量RNA酶的来源。•TRIzol试剂的存在，可保护RNA酶对RNA的污染。下游样品处理要求非一次性的玻璃器皿或塑料器皿无RNA酶。玻璃物品可以在150°C烘烤4小时，塑料制品，可浸泡10分钟的0.5MNaOH溶液，然后用清水彻底冲洗，并高压蒸汽灭菌。其他需要注意的事项：•用小于2毫升体积的TRIZOL试剂工作时，建议使用一次性透明

6、聚丙烯管。•对于较大的体积，用玻璃（Corex）或聚丙烯管，并测试以确保该管装满TRIzol试剂和氯仿时可承受12,000×g的离心力，不要使用泄漏或有裂纹的管子。•离心前小心平衡管子的重量•玻璃管必须用封口膜密封，密封时封口膜要覆盖有螺丝处，聚丙烯管离心前必须盖好。RNA提取的指导：警告：当使用TRIzol试剂工作时，应使用手套，并保护眼睛（屏蔽、安全护目镜）。避免与皮肤或衣服接触。使用化学通风橱。避免吸入蒸气。除非特别注明，所有程序均在15-30°C下进行，试剂也放置于15-30°C。需要的试剂为：•氯仿•异丙醇•75%酒精(溶于DEPC处理的

7、水中)•无RNase的水或0.5%SDS溶液[RNase-free水的准备：把水加入到RNase-free的玻璃瓶中，加入diethylpyrocarbonate(DEPC)至0.01%(v/v).静置过夜，高压蒸汽灭菌。SDS溶液必须使用DEPC处理的水，并高压灭菌。]1.均质化(seenotes1-3)a.组织®均质50-100毫克组织样本需要1毫升的TRIzol试剂，使用特富龙玻璃或强力均质机（Polytron,orTekmar'sTISSUMIZER®TISSUMIZER®或相当的仪器）。均质时样本体积不应超过TRIzol试剂体积的10％。

8、b.单层细胞直接在培养皿中裂解细胞，3.5厘米直径的皿中加入TRIzol试剂1毫升，并通过抽吸几次促进细胞裂解。TRIzo