vav3及epha2蛋白在喉癌组织中的表达及其相关性研究

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1、VAV3及EphA2蛋白在喉癌组织中的表达及其相关性研究(1、河北省沧州市人民医院耳鼻喉科，河北，沧州，061000;2、河北省军区沧州干休所，河北，沧州，061000;3、河北医学院第四医院耳鼻喉科，河北，石家庄，050000)R739.65A目的：研究分析Vav3与EphA2蛋白喉鱗状细胞癌组织中的表达情况，同时研究它们与临床病理参数之间的关系，以及二者表达的相关性。方法：回顾分析2010年1月至2015年01月期间在沧州市人民医院耳鼻咽喉科手术切除的喉组织，其中喉鳞状细胞癌组织和喉部非癌组织各为43和10

2、例。采用免疫组织化学方法检测Vav3蛋白与EphA2蛋白表达情况。采用SPSS16.0统计软件进行了统计学分析。其中，各组率比较采用了χ2检验及Fisher确切概率法。其相关性的分析应用了Spearman等级相关分析。结果：Vav3蛋白在喉癌组织中阳性表达率为69.76%，EphA2蛋白在喉癌组织中阳性表达率为55.81%。它们表达分别与不同临床分期、T分期及淋巴结转移有统计学意义(p<0.05)，而与性别、年龄、吸烟、分型之间无统计学意义(p>0.05)o结论：Vav3蛋白与EphA2蛋白

3、在喉癌组织中均呈高表达，且两者呈正相关性，它们可能成为新的喉癌细胞标志物和治疗新靶点。【关键词】喉鳞状细胞癌；Vav3蛋白；EphA2蛋白.1八—刖g喉鳞状细胞痛(laryngealsquamouscellcarcinoma,LSCC)是人类最常见的头颈部恶性肿瘤之一，它严重威胁着人类的健康。近年来，喉癌发病率呈明显增长趋势。喉癌原发牛.于声带部位者居多，约占60%[1]。研究喉鳞状细胞癌的发病机制，为我们了解其生物学行为，早期的诊断与治疗提供帮助。Vav家族蛋白是Rho家族GTPase鸟囉呤核苛酸转移因子。V

4、av3蛋白是Vav家族蛋白的成员之一，它可通过调节Rho、EphA2、Rac亚家族等许多因子积极参与维持细胞形态、细胞黏附、血管生成，在调节免疫功能和细胞分化等过程中发挥着重要的作用。Vav3蛋白与EphA2蛋白的研宄，对预测喉癌发展和预后治疗具奋深远意义。1资料与方法1.1一般资料实验材料来源于2010年1月至2015年1月期间在沧州市人民医院耳鼻咽喉科手术切除的喉组织，其中喉鱗状细胞癌组织和喉部非癌组织各为43和10例。鳞状细胞癌组织为病理诊断所证实。喉部的非癌组织为经病理证实非癌组织。其中喉癌病例男性为3

5、2例，女性为11例；年龄范围为45〜76岁，中位年龄54岁。高中分化24例，低分化10例。按照2002年UICCTNM分期标准，T1期9例，T2期15例，T3期13例，T4期6例；声门上型18例，声门型25例；淋巴结转移19例，无淋巴结转移24例。1.3检测指标所有患者均为初治、未经过放化疗，奋完整的临床及病理学资料。病理类型为鱗状细胞癌；肿瘤部位为喉声门及声门上区；未患奋艽他原发癌或远处转移癌。石蜡组织完整（福尔马林固定及石蜡包埋），大小适当（长径≤2cm，宽>；2mm）,除外蜡块无可供分析的肿瘤组

6、织标本。1.4病理学诊断及临床分型标准本研究过程中，依据美国癌症联合委员会（AmericanJointCommitteeonCancer,AJCC）2002年公布的喉癌分型方案［2］。本研究为冋顾性分析，对患者身体无副损伤。1.5实验方法链霉素抗生物素蛋白-过氧化酶法（SP法）检测43例喉鳞状细胞癌患者组织、10例正常喉组织中VAV3、EphA2的表达情况。1.5.1组织标本处理1.5.1.1喉组织标本分别取喉鱗状细胞癌癌灶、正常喉组织。艽中，正常喉组织取自于喉癌根治术，未被喉鱗状细胞癌侵犯的喉正常组织。1.5

7、.1.2首先，将标本固定于4%甲醛溶液中24小时，分别浸泡于梯度乙醇中2h、以及无水乙醇I、无水乙醇II各lh。二甲苯I和二甲苯II再分别浸泡0.5h与15min，石蜡I与石蜡II分别为lh与2h后，开始进行标本脱水及浸蜡。将制成的喉组织蜡块置于冰箱内进行冷却约15min左右，再进行切片，切片厚度为4μm。将蜡片放置在展片仪水盒内，水温约45°C左右，捞起切片进行编号。而后放入烤箱中60°C烘烤切片30mino将制好的切片应用于常规的病理诊断与免疫组织化学染色。1.5.2对照组设计检测VAV3及EphA2

8、的表达情况均选取PBS代替•一抗作阴性对照。1.5.3结果判定标准染色细胞内出现棕色颗粒的为阳性表达。2名病理医师在不知病例详细资料的前提下对喉组织病理切片进行阅片。选取每张病理切片至少10个不同的视野在高倍镜下(×400)观察，以此来判断细胞染色强度与着色率。1.6统计学方法应用SPSS16.0软件进行统计学分析。各组率间比较采用χ2检验和Fisher确切概率法。