生物化学实验练习题及参考答案[1]

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1、生物化学实验一、名词解释：分配层析法电泳同工酶酶活性分光光度法层析技术比活力二、填空题：1.测定蛋白质含量的方法有，，和。2.CAT能把H2O2分解为H2O和O2，其活性大小以来表示，当CAT与H2O2反应结束，再用测定未分解的H2O2。3.聚丙烯酰胺凝胶电泳是以作为载体的一种区带电泳，这种凝胶是由和交联剂在催化剂作用下聚合而成。化学聚合法一般用来制备_____________胶，其自由基的引发剂是，催化剂是______________；光聚合法适于制备大孔径的_________________胶，催化剂是

2、______________。4.层析技术按分离过程所主要依据的物理化学性质进行分类，可分成以下几种：_______________，_______________，_______________，_______________和________________。5.使用离心机离心样品前，必须使离心管__________且对称放入离心机。6.米氏常数可近似表示酶和底物亲合力，Km愈小，表示E对S的亲合力愈，Km愈大，表示E对S的亲合力愈。7.分光光度计在使用之前必须预热，注意预热及样品槽空时必须________

3、_（打开、合上）样品池翻盖。8.CAT是植物体内重要的酶促防御系统之一，其活性高低与植物的密切相关。9.纸层析实验中，____________形成固定相，____________流动相。10.聚丙烯酰胺凝胶是是由和交联剂在催化剂作用下聚合而成的，在具有自由基团体系时，两者就聚合。引发产生自由基的方法有两种：和。11.层析技术按按固定相的使用形式进行分类，可分成以下几种：_______________，_______________，_______________和________________。三、问答题：1

4、、简述4种测定蛋白质含量的方法及其原理。2、简述不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳中的三个不连续及三种物理效应。3、试分析影响电泳的主要因素有哪些？参考答案：生物化学实验一、名词解释：1、电泳：指带电粒子在电场中向与其自身所带电荷相反的电极方向移动的现象。2、同工酶：指催化同一种化学反应，但其酶蛋白本身的分子结构组成却有所不同的一组酶。3、分配层析法：用物质在两种或两种以上不同的混合溶剂中的分配系数不同，而达到分离目的的一种实验方法。4、酶活性：酶催化化学反应的能力，往往以酶促反应的初速度表示。5、分光光度法：基于溶液对

5、光吸收的大小来确定被测组份的含量的分析方法称为分光光度法或吸光光度法。6、层析技术：是利用被分离的混合物中各组分的理化性质（分子的形状和大小、分子极性、吸附力、分子亲和力、分配系数等）的不同，使各组分以不同程度在流动相和固定相中进行分配，最终达到分离目的。7、比活力：即每毫克酶蛋白所含酶的活力单位数。比活力高，表示酶纯度高。二、填空题：1.双缩脲法，紫外吸收法，Folin-酚试剂法（Lowry法），考马斯亮蓝G-250染色法2.以一定时间内分解的H2O2量，碘量法3.聚丙烯酰胺凝胶，Acr，Bis，分离胶，Ap

6、，TEMED，浓缩胶，核黄素4.（1）吸附层析（2）分配层析（3）离子交换层析（4）凝胶层析（5）亲和层析5.等重6.大，小7.打开8.抗逆性9.丙烯酰胺单体（Acr），N，N’-甲叉双丙烯酰胺（Bis），化学法，光聚合法，10.（1）柱层析，（2）纸层析，（3）薄层层析，（4）薄膜层析等；三、问答题：1、简述4种测定蛋白质含量的方法及其原理。答：(1)考马斯亮蓝G-250染色法：考马斯亮蓝G-250结合蛋白质后，形成蓝色CBG-蛋白质结合物，最大光吸收在595nm。在一定的蛋白质浓度范围内（10-1000ug

7、/ml），CBG-蛋白质结合物的O.D595nm值与蛋白质含量成正比，故可用分光光度法进行蛋白质的定量测定。（2）双缩脲法：蛋白质含有两个以上的肽键（-CO-NH-）因此，有双缩脲反应，在碱性溶液中蛋白质与Cu2+形成紫色络合物，其颜色深浅与蛋白质含量成正比，而与蛋白质的相对分子质量及aa成分无关，故可以用来测定蛋白质含量；（3）Folin-酚试剂法（Lowry法）：是双缩脲法的发展，第一步涉及到碱性溶液中铜蛋白质复合物的形成，然后这个复合物还原磷钼酸－磷钨酸试剂，产生深蓝色（钼蓝和钨蓝混合物）比双缩脲法灵敏，

8、但费时；（4）紫外吸收法：蛋白质中一些氨基酸残基中的苯环含有共轭双键，所以蛋白质具有吸收紫外光的性质，最大吸收峰在280nm处，在一定范围内，蛋白质溶液的光吸收值与蛋白质含量成正比，可用作定量测定，简单、灵敏、快速、不耗样品，低浓度的盐类不干扰。（5）微量凯式定氮法：根据蛋白质的平均含氮量为16%，因此，测得1g蛋白氮，相当于6.25g蛋白质。2、简述不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳中的三个不