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1、中华人民共和国国家标准GB5009.84—2016食品安全国家标准食品中维生素B1的测定2016-08-31发布2016-09-20实施中华人民共和国发布国家卫生和计划生育委员会GB5009.84—2016前言本标准代替GB/T5009.84—2003《食品中硫胺素(维生素B1)的测定》、GB5413.11—2010《食品安全国家标准婴幼儿食品和乳品中维生素B1的测定》、GB/T7628—2008《谷物中维生素B1的测定》、GB/T9695.27—2008《肉与肉制品维生素B1含量测定》。本标准与GB
2、/T5009.84—2003相比,主要变化如下:———标准名称修改为“食品安全国家标准食品中维生素B1的测定”;———增加了高效液相色谱法,作为第一法,将荧光光度法作为第二法;———修改了检出限的表达,增加了方法的定量限;———增加了人造沸石预处理中氯离子的定性鉴别方法;———增加了溴甲酚绿为指示剂时,溶液颜色的变化特征;———删去了图1(反应瓶)和图2(盐基交换管)结构图;———增加了人造沸石以湿重表示时的称取量。ⅠGB5009.84—2016食品安全国家标准食品中维生素B1的测定1范围本标准规定了
3、高效液相色谱法、荧光光度法测定食品中维生素B1的方法。本标准适用于食品中维生素B1含量的测定。第一法高效液相色谱法2原理样品在稀盐酸介质中恒温水解、中和,再酶解,水解液用碱性铁氰化钾溶液衍生,正丁醇萃取后,经C18反相色谱柱分离,用高效液相色谱-荧光检测器检测,外标法定量。3试剂和材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。3.1试剂3.1.1正丁醇(CH3CH2CH2CH2OH)。3.1.2铁氰化钾[K3Fe(CN)6]。3.1.3氢氧化钠(NaOH)。3.1.4盐
4、酸(HCl)。3.1.5乙酸钠(CH3COONa·3H2O)。3.1.6冰乙酸(CH3COOH)。3.1.7甲醇(CH3OH):色谱纯。3.1.8五氧化二磷(P2O5)或者氯化钙(CaCl2)。3.1.9木瓜蛋白酶:应不含维生素B1,酶活力≥800U(活力单位)/mg。3.1.10淀粉酶:应不含维生素B1,酶活力≥3700U/g。3.2试剂配制3.2.1铁氰化钾溶液(20g/L):称取2g铁氰化钾,用水溶解并定容至100mL,摇匀。临用前配制。3.2.2氢氧化钠溶液(100g/L):称取25g氢氧化钠
5、,用水溶解并定容至250mL,摇匀。3.2.3碱性铁氰化钾溶液:将5mL铁氰化钾溶液与200mL氢氧化钠溶液混合,摇匀。临用前配制。3.2.4盐酸溶液(0.1mol/L):移取8.5mL盐酸,加水稀释至1000mL,摇匀。3.2.5盐酸溶液(0.01mol/L):量取0.1mol/L盐酸溶液50mL,用水稀释并定容至500mL,摇匀。3.2.6乙酸钠溶液(0.05mol/L):称取6.80g乙酸钠,加900mL水溶解,用冰乙酸调pH为4.0~5.0之间,加水定容至1000mL。经0.45μm微孔滤膜过
6、滤后使用。1GB5009.84—20163.2.7乙酸钠溶液(2.0mol/L):称取27.2g乙酸钠,用水溶解并定容至100mL,摇匀。3.2.8混合酶溶液:称取1.76g木瓜蛋白酶、1.27g淀粉酶,加水定容至50mL,涡旋,使呈混悬状液体,冷藏保存。临用前再次摇匀后使用。3.3标准品维生素B1标准品:盐酸硫胺素(C12H17ClN4OS·HCl)),CAS:67-03-8,纯度≥99.0%。3.4标准溶液配制3.4.1维生素B1标准储备液(500μg/mL):准确称取经五氧化二磷或者氯化钙干燥2
7、4h的盐酸硫胺素标准品56.1mg(精确至0.1mg),相当于50mg硫胺素、用0.01mol/L盐酸溶液溶解并定容至100mL,摇匀。置于0℃~4℃冰箱中,保存期为3个月。3.4.2维生素B1标准中间液(10.0μg/mL):准确移取2.00mL标准储备液,用水稀释并定容至100mL,摇匀。临用前配制。3.4.3维生素B1标准系列工作液:吸取维生素B1标准中间液0μL、50.0μL、100μL、200μL、400μL,800μL,1000μL,用水定容至10mL,标准系列工作液中维生素B1的浓度分别
8、为0μg/mL,0.0500μg/mL,0.100μg/mL,0.200μg/mL,0.400μg/mL,0.800μg/mL,1.00μg/mL。临用时配制。4仪器和设备4.1高效液相色谱仪,配置荧光检测器。4.2分析天平:感量为0.01g和0.1mg。4.3离心机:转速≥4000r/min。4.4pH计:精度0.01。4.5组织捣碎机(最大转速不低于10000r/min)。4.6电热恒温干燥箱或高压灭菌锅。5分析步骤5.1试样的制备5.1.1液体或固
