gbt 28089-2011 葱类黑粉病菌检疫鉴定方法

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1、ICS65．020．01B16香旦中华人民共和国国家标准GB／T28089--201葱类黑粉病菌检疫鉴定方法DetectionandidentificationofUrocystiscepulaeFrost2011—12-30发布2012—06-01实施宰瞀髁鬻瓣訾矬瞥翼发布中国国家标准化管理委员会促1”刖置GB／T28089--2011本标准按照GB／T1．1—2009给出的规则起草。本标准由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC／TC271)提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国山东出入境检验检疫局、中华人民共和国北京出入境检验检疫局、中华人民共和国湖北出入境检验检疫局。本

2、标准主要起草人：邵秀玲、赵汗青、王英超、种焱、吴兴海、张治宇、江丽辉、高文娜、张京萱、宋涛、罗志萍。1范围葱类黑粉病菌检疫鉴定方法本标准规定了葱类黑粉病菌检疫鉴定方法。本标准适用于洋葱等葱属中葱类黑粉病菌的检疫和鉴定。2规范性引用文件GB／T28089--2011下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。G13／T18085植物检疫小麦矮化暹黑穗病菌检疫鉴定方法SN／T1157进出境植物苗木检疫规程SN／T1809进出口植物种子检疫规程3术语和定义下列术语和定义适用于

3、本文件。3．1孢子球sporeballs由一至多数冬孢子集结而成，易分开成单独的冬孢子或坚固而不易分离，外层有浅色的较小的不孕细胞包围。4葱类黑粉病菌基本信息中文名：葱类黑粉病菌。学名：UrocystiscepulaeFrost1877异名：Tuburciniacepulae(Frost)Liro1922，Tuburciniamagica(Pass．)Liro1922，UrocystiscolchicivaLcepulaeCooke1877，UrocystismagicaPass．1875。病害英文名：onionsmut。属真菌界Fungi，担子菌亚门Basidiomycotin

4、a，黑粉菌纲Ustilaginomycetes，条黑粉菌目Urocys—tales，条黑粉菌科Urocystaceae，条黑粉菌属Urocystis。葱类黑粉病菌的其他信息参见附录A。5方{去原理经现场查验，实验室分离培养，根据病原菌的形态特征、生物学特性，结合寄主范围进行结果判定。6仪器和用具6．1生物显微镜(具油镜镜头，具测量功能)、具透射光源的体视显微镜(放大倍数不低于50×)。GB／T28089--20116．2超净工作台。6．3电子天平。6．4光照恒温培养箱。6．5酒精灯。6．6高压灭菌器。6．7培养皿。6．8医用手术剪、镊子。6．9烧杯(500mL)。6．10试管(直

5、径12mm)。6．11载玻片、盖玻片。6．12量筒(500mL)。6．13微量可调加样器(5pL～20pL)。6．14刻度离心管：10mL或20mL。6．15加样器枪头(2pL～20pL)。6．16三角瓶(250mL)。6．17席尔氏浮载剂(见GB／T18085)。6．18干热灭菌器。6．19往复式振荡器。6．20涡旋振荡器。7主要试剂7．1蒸馏水。7．2吐温一20。7．31％的次氯酸钠溶液。7．4洋葱琼脂培养基。8现场检测8．1抽样方法棋盘式、五点式或随机抽样。8．2抽样数量8．2．1种子对来自葱类黑粉病菌发生国家和地区(参见附录A)的洋葱等种子按SN／T1809进行抽样。8．

6、2．2洋葱、大蒜等鳞茎对洋葱、大蒜等鳞茎按SN／T1157进行抽样。8．3症状检查对洋葱、大蒜等鳞茎，注意检查鳞茎上是否有典型的黑粉症状，挑选个头小(孢子在鳞茎上产生可能引起鳞茎变小)、干腐的鳞茎，洋葱鳞茎常形成铅色到黑色的条斑；洋葱叶片上形成铅色到黑色的轻微变GB／T28089--2011厚的条斑或水泡，当增厚区域较大时可引起子叶向下弯曲。随着叶片基部病斑的扩大，病斑破裂潺出大量的黑色粉末。受侵染的植株通常变得矮小。收集上述可疑植物材料等一并带回实验室检验。9实验室检测9．1鳞茎和寄主残体上病菌的鉴定选取具有黑粉症状的可疑病斑，用针刺破囊肿，用席尔氏浮载剂制成玻片，在显微镜下观

7、察孢子球的形态特征。9．2种子上病菌的鉴定9．2．1制备平均样品在实验室内将送检样品充分混匀，制成平均样品。9．2．2称样从平均样品中称取50g作为实验样品。9．2．3洗涤离心实验样品倒入经干热灭菌(165℃，1．5h)后的250mL三角瓶内，加蒸馏水100mL，再加表面活性剂吐温一20(1滴～2滴)，用铝铂纸或parafilm膜将三角瓶封口。将三角瓶放在复式振荡器上振荡5rain，立即取下三角瓶，将悬浮液注入干热灭菌的10mL～20mL刻度离心管内离心(1000r／rain)3