最新spr--biacore培训清华ppt课件.ppt

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1、进入夏天，少不了一个热字当头，电扇空调陆续登场，每逢此时，总会想起那一把蒲扇。蒲扇，是记忆中的农村，夏季经常用的一件物品。　　记忆中的故乡，每逢进入夏天，集市上最常见的便是蒲扇、凉席，不论男女老少，个个手持一把，忽闪忽闪个不停，嘴里叨叨着“怎么这么热”，于是三五成群，聚在大树下，或站着，或随即坐在石头上，手持那把扇子，边唠嗑边乘凉。孩子们却在周围跑跑跳跳，热得满头大汗，不时听到“强子，别跑了，快来我给你扇扇”。孩子们才不听这一套，跑个没完，直到累气喘吁吁，这才一跑一踮地围过了，这时母亲总是，好似生气的样子，

2、边扇边训，“你看热的，跑什么？”此时这把蒲扇，是那么凉快，那么的温馨幸福，有母亲的味道！　　蒲扇是中国传统工艺品，在我国已有三千年多年的历史。取材于棕榈树，制作简单，方便携带，且蒲扇的表面光滑，因而，古人常会在上面作画。古有棕扇、葵扇、蒲扇、蕉扇诸名，实即今日的蒲扇，江浙称之为芭蕉扇。六七十年代，人们最常用的就是这种，似圆非圆，轻巧又便宜的蒲扇。　　蒲扇流传至今，我的记忆中，它跨越了半个世纪，也走过了我们的半个人生的轨迹，携带着特有的念想，一年年，一天天，流向长长的时间隧道，袅SPR--Biacore培训2

3、011清华Biacore分析的基本步骤Ligand偶联到芯片表面Analyte进样再生analyteligand23应该选择哪种传感芯片?Biacore为各种仪器提供9种传感芯片满足广泛的实验需求7传感器芯片金膜玻璃羧基化的葡聚糖AlkanethiolmoleculesCarboxymethylateddextran提供亲水环境提供生物分子共价结合的化学基础惰性分子柔性8传感芯片CM5羧基化的葡聚糖表面最常用的传感芯片卓越的化学稳定性实验的首选9氨基偶联的注意事项PI(等电点)：判断是否可以进行氨基偶联，P

4、I要求不小于4配体通过静电效应，配体带正电、葡聚糖带负电，聚集在芯片表面pH=pI蛋白质等电点：该pH下目标蛋白不带电荷pHpI蛋白质等电点:目标蛋白带负电荷10预实验--preconcentration使用不同PH值的10mMNaAc缓冲液溶解配体，注射1-2分钟左右配体浓度：参考30-50KD蛋白为例，准备蛋白浓度10-50ug/ml根据预结合得到的实验结果判断最合适的偶联PH值相同时间内结合的越多，峰型越陡，并且没有饱和现象出现的为最适PH值如果相邻PH的结合

5、结果相差不多，选用靠近中性的PH值11纯度：高于90%偶联缓冲液10mMsodiumacetatebuffer，3.5

6、CM4和CM3传感芯片CM4羧基化的葡聚糖表面，羧基化程度低于CM5(所带的负电荷较少)减少了对带强正电荷蛋白的非特异性结合，例如在细胞的水解样品和匀浆中比较容易得到较低的Rmax，便于进行动力学研究传感芯片CM3羧基化的葡聚糖表面葡聚糖链长度较CM5短,但羧基化程度相同适用于细胞、病毒和多组分的混合物便于得到较低的偶联水平14传感芯片SA在羧基化的葡聚糖表面覆盖了一层链霉生物素（streptavidin）非常适合用于捕获生物素标记的DNA大片段，进行核酸之间的相互作用研究可捕获生物素标记的配体，如糖类、肽

7、段，蛋白质，DNA等捕获（capture）方式：位点特异性，定向偶联，偶联量低15链霉生物素和生物素的亲和力很高，因此捕获的分子很难从芯片上洗下，类似于共价偶联KD=10-15M16传感芯片NTA在羧基化的葡聚糖表面覆盖了一层氨三乙酸（NTA）通过金属螯合作用捕获带有末端组氨酸修饰（His-tagged）的配体蛋白分子17空间定向结合能很好地保持生物分子的空间结构，捕获方式只需普通的再生条件，EDTA纯化条件可提供参考：低浓度咪唑洗脱的蛋白偶联在NAT芯片上,基线可能不稳定，对于小分子的analyte和动力

8、学分析有影响NTA芯片价格贵18传感芯片HPA疏水表面适用于单层脂质分子和膜相关蛋白的相互作用分析为细胞膜相关蛋白的相互作用分析提供了增溶技术研究细胞膜受体在膜环境内与配体的相互作用19传感芯片L1在羧基化的葡聚糖表面覆盖了一层亲脂物质适用于在保持磷脂双分子层的结构的同时，快速和高重复性地捕获脂质体分子不需对锚定的分子进行合并20传感芯片–总结CM5最常用的传感芯片CM4为获取更低的Rmax，并减少类似于在天然样