最新3.2《月季的花药培养》课件(新人教版选修1)教学讲义PPT.ppt

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1、3.2《月季的花药培养》课件(新人教版选修1)一、被子植物的花粉发育花丝花药一、被子植物的花粉发育注意：①二核花粉粒：成熟的花粉粒中，只含花粉管细胞核和生殖细胞核。（精子在花粉管中形成）②三核花粉粒：有些植物的花粉，在成熟前，生殖细胞进行一次有丝分裂，形成两个精子，这样的花粉在成熟时，含有一个营养核和两个精子。③两个精子和一个营养核的基因型相同。④1花粉母细胞4个小孢子减分有分4个花粉管细胞核4个生殖细胞核有分8个精子实例一：关于被子植物花粉发育的说法，不正确的是（）A、花粉粒是在花药中的花粉囊里形成的B、被子植物精子的形成是直接减数分裂

2、的结果C、被子植物的花粉的发育要经历四分体时期、单核期、双核期等阶段D、花粉粒在发育过程中，核先位于细胞一侧，再移到细胞中央花粉母细胞经减数分裂形成4个单核花粉粒，每个花粉粒的细胞核进行一次有丝分裂形成1个花粉管细胞核和1个生殖细胞核，每个生殖细胞核再进行一次有丝分裂生成2个精子。BD二、产生花粉植株的两种途径二、产生花粉植株的两种途径花药胚状体愈伤组织丛芽移栽丛芽生根基础知识（二）产生花粉植株的两种途径①②移栽花药中的花粉胚状体脱分化愈伤组织花药中的花粉脱分化分化丛芽再分化丛芽诱导生根愈伤组织：在人工培养基上由外植体长出来的一团无序生长

3、的薄壁细胞（细胞排列疏松、无规则）。基础知识（二）产生花粉植株的两种途径体细胞胚（胚状体）：在组织培养过程中，某些体细胞在形态上转变为与合子发育成的胚非常相似的结构，发育过程亦与合子胚类似，被称为体细胞胚（胚状体）。花粉胚形成的小植株三、影响花药培养的因素植物类型：生理状态：花期早期的花药反应能力较好花粉发育时期：一般而言单核后期花药对培养反应较好影响花药培养的因素主要的影响因素：材料的选择与培养基的组成。(一)材料的选择（1）接种的花药时期：一般来说，在单核期，细胞核由中央移向细胞一侧时，花药培养成功率最高。选择完全未开放的花蕾，可挑选

4、到单核期的花药，菌少、易消毒；花瓣松动，菌多，消毒困难。（2）此外，亲本植株的生长条件、材料的低温预处理以及接种密度对诱导成功率都有一定的影响。(二)培养基的组成小麦中为N6，马铃薯、月季中为MS，油菜中为B5培养基.为什么花瓣松动会给材料的消毒带来困难？花瓣松动后，微生物就可能侵入到花药，给材料的消毒带来困难。实验操作一、材料的选取二、材料的消毒三、接种和培养一、材料的选取1、选择花药一般通过镜检来确定其中的花粉是否处于适宜的发育期。2、确定花粉发育时期最常用方法有醋酸洋红法。但是，某些植物的花粉细胞核不易着色，需采用焙花青-铬矾法，这

5、种方法能将花粉细胞核染成蓝黑色。注：花粉细胞核内有染色体，染色体主要由DNA和蛋白质组成，醋酸洋红为碱性染色剂，染色体容易被染色。通过染色，可以确定细胞核为单核期还是双核期，是单核居中期还是单核靠边期。一般单核靠边期的花药培养成功率最高。实验操作一、材料的选取1、醋酸洋红法①醋酸洋红的配置将体积分数45％的醋酸100ml煮沸，缓缓加入1g洋红，在加热回流8h，冷却至50℃，过滤即可。②染色操作将花药放在载玻片上，加一滴质量分数1％的醋酸洋红，用镊柄将花药捣碎，盖上盖玻片在显微镜下检查。实验操作一、材料的选取2、焙花青—铬钒法①卡诺氏固定液

6、的配制方法将无水酒精与冰醋酸按体积比为3：1的比例混匀②焙花青—铬钒溶液的配制方法将5g铬明矾[K2SO4Cr2(SO4)·24H2O]加入90ml蒸馏水中，溶解后加入0.1g焙花青，混匀并加热至沸腾，煮沸5分钟后冷却至室温，过滤，加蒸馏水定容至100ml③染色操作花药应该在卡诺氏固定液中固定20min，然后取出放在载玻片上，加焙花青—铬钒溶液染色，盖上盖玻片后在显微镜下检查。这种方法能将花粉细胞核染成蓝黑色。1、酒精处理①花蕾用体积分数为70%的酒精浸泡30秒，立即取出。②无菌水清洗③无菌吸水纸吸干花蕾表面的水分.二、材料的消毒2、消毒

7、液处理①放入质量分数为0.1%的氯化汞溶液中2~4分钟（也可质量分数为1%的次氯酸钙溶液或饱和漂白粉溶液）②无菌水冲洗3~5次用于培养花药，实际上多数未熟，由于它的外面有花萼、花瓣或颖片保护，通常处于无菌状态，所以只要将整个花蕾或幼穗消毒即可。二、材料的消毒在无菌条件下除去萼片和花瓣用镊子取出花药②要彻底去除花丝，因为与花丝相连的花药不利于愈伤组织或胚状体的形成立即将花药接种于培养基上，通常每瓶接种花药7-10个。1、剥取花药①勿损伤花药，以免诱导出非花粉愈伤组织2、接种注意：三、接种和培养①培养条件：温度控制在25℃左右，不需要光照。幼

8、小植株形成后才需要光照。3、培养②培养：一般经过20-30天培养后，会发现花药开裂，长出愈伤组织或释放出胚状体长出愈伤组织则将愈伤组织及时转移到分化培养基上，以便进一步分化出再生植株③注意：如