欢迎来到天天文库
浏览记录
ID:6181592
大小:685.50 KB
页数:10页
时间:2017-11-14
《细胞技术方法和传代方法》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、细胞培养细胞的传代方法培养细胞的方法主要讲2方面问题:细胞计数培养的细胞在一般条件下要求有一定的密度才能生长良好,所以要进行细胞计数。计数结果以每毫升细胞数表示。细胞计数的原理和方法与血细胞计数相同。血细胞计数器:手工计数细胞Coulter计数仪:人工计数细胞计数:1、将血球计数板及盖片擦拭干净,并将盖片盖在计数板上。2、将细胞悬液吸出少许,滴加在盖片边缘,使悬液充满盖片和计数板之间。3、静置3分钟。4、镜下观察,计算计数板四大格细胞总数,压线细胞只计左侧和上方的。然后按下式计算: 细胞数/ml=4大格细胞
2、总数/4×10000注意:镜下偶见由两个以上细胞组成的细胞团,应按单个细胞计算,若细胞团占10%以上,说明分散不好,需重新制备细胞悬液。根据细胞生长的恃点,传代方法有3种:1.悬浮生长细胞传代离心法传代:离心(1000转/分)去上清,沉淀物加新培养液后再混匀传代。直接传代法:悬浮细胞沉淀在瓶壁时,将上清培养液去除l/2一2/3,然后用吸管直接吹打形成细胞悬液再传代。细胞传代方法2.半悬浮生长细胞传代(Hela细胞)此类细胞部分呈现贴壁生长现象,但贴壁不牢,可用直接吹打法使细胞从瓶壁脱落下来,进行传代。3.贴壁生
3、长细胞传代采用酶消化法传代。常用的消化液有0.25%的胰蛋白酶液。贴壁生长细胞传代方法:1吸光培养瓶中的培养液2加入1-2ml0.25%的胰蛋白酶液(以消化液能覆盖整个瓶底为准)静置2-10min(显微镜下动态监测)。3吸去胰蛋白酶液,加入培养液。4用吸管吸取瓶内培养液,反复吹打瓶壁细胞,形成细胞悬液。5离心,细胞沉淀用培养液制成悬液。5吸取1/10—1/40细胞悬液,接种于新的培养瓶内。6加适量新鲜培养液于接种了细胞悬液的新培养瓶内。7将后者放入培养箱中培养。谢谢!
此文档下载收益归作者所有