番茄黄化曲叶病毒检疫鉴定方法

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1、番茄黄化曲叶病毒检疫鉴定方法《地方标准编制说明》一、工作简况：1.1任务来源根据《陕西省质量技术监督局关于下达2015年第一批地方标准制修订项目计划的通知》(陕质监标[2015]8号文件），“番茄黄化曲叶病毒病检测鉴定技术”（项目编号：SDBXM2-2015）于2015年5月5日正式下达编制任务。并依据陕西省技术监督局文件开始编写“番茄黄化曲叶病毒检疫鉴定方法”。1.2协作单位本规范由陕西省动物研究所、陕西省生物农业研究所和陕西省园艺蚕桑技术工作站共同起草完成。1.3主要工作过程2015年5月由陕西省动物研究

2、所向陕西省质量技术监督局提出申请的《番茄黄化曲叶病毒检疫鉴定方法》获得批准立项。6月份，开始了《番茄黄化曲叶病毒检疫鉴定方法》的起草工作。（1）2015年7月，成立项目组，制订编制计划。（2）2015年7月至2015年12月，开始收集和整理国内相关技术标准资料，对番茄黄化曲叶病毒病的毒源鉴定方法、病毒病分子生物学鉴定方法发展情况进行调研。（3）2016年1月至2016年6月，对标准初稿进行意见征询和论证，经项目组外7位省内专家（见表1）仔细审阅，共提出了15条修改意见，通过进一步查阅资料和讨论，采纳了其中的1

3、3条。对附录C2.6部分，内容为“如果PCR产物序列与番茄黄化曲叶病毒的序列同源，则可判定样品为番茄黄化曲叶病毒阳性，若序列不同源，则可判定样品为番茄黄化曲叶病毒阴性。”部分采纳，理由参考同类标准，同源率也无具体的数值，不同物种同源率不同，修改为“如果PCR产物序列与番茄黄化曲叶病毒的序列同源性达到99%及以上，则可判定样品为番茄黄化曲叶病毒阳性，未扩增到543bp的条带，则判定为阴性。”对修改意见“附录中所有表格因有表头，并采用三线表”不予采纳，理由是根据标准编写原则，表格均为实线，而非三线表。2016年7

4、月项目组召开了编制人员参加的讨论会，对标准初稿进行修改和完善。（5）2016年7月至2016年11月，根据征求意见情况，对《番茄黄化曲叶病毒检疫鉴定方法》标准进行了完善修改，2016年11月完成了标准送审稿。表1“番茄黄化曲叶病毒检疫鉴定方法”意见征询专家名单序号姓名职称从事专业工作单位1仵均祥教授昆虫学西北农林科技大学2刘俊生总农艺师植物保护陕西省植保总站3张志斌研究员园艺中国农业科学院蔬菜花卉研究所4吴云锋教授植物病理学西北农林科技大学5王刚云研究员植物保护商洛市植保植检站6杨兆森研究员植物保护渭南市植保

5、植检站7冯安荣高级农艺师植物保护富平县农业技术推广中心1.4起草组成员及其所做的主要工作项目承担单位陕西省动物研究所联合陕西省园艺蚕桑技术工作站两个起草单位及时成立标准制定小组，明确任务分工，制定编写要求，统一思想，规划工作思路，为标准制定建立了组织保障。标准制定成员有李英梅、杨苗苗、巨海林、刘晨等具体见表2。表2地方标准编写小组成员序号姓名职称工作单位备注1李英梅副研究员陕西省动物研究所负责人主编人2杨苗苗副研究员陕西学前师范学院编写人3巨海林高级农艺师陕西省园艺蚕桑技术工作站编写人4刘晨助理研究员陕西省动

6、物研究所编写人5张伟兵高级农艺师陕西省园艺蚕桑技术工作站编写人6洪波助理研究员陕西省动物研究所编写人7张锋副研究生陕西省动物研究所参与部分工作8王晨光高级农艺师陕西省农技推广总站参与部分工作9陈志杰研究员陕西省动物研究所参与部分工作10张淑莲研究员陕西省动物研究所参与部分工作二、标准编制原则和确定标准主要内容1、标准编制原则（1）以符合国家及地方相关法律、法规的规定为原则；（2）以符合已经颁布的国家及行业等相关标准为原则；（3）立足于简单实用的番茄黄化曲叶病毒病鉴定方法，为各级检疫部门提供快速、简易的鉴定方法

7、，防止带病毒番茄在无病区传播为害。2、标准主要内容按照国家标准和行业标准的格式，《番茄黄化曲叶病毒检疫鉴定方法》内容包括范围、规范性引用文件、番茄黄化曲叶病毒基本信息、方法与原理、仪器设备用具及试剂、样品制备、检测方法、结果判定、样品及资料保存、附录共10部分。本项检疫方法中所涉及的方法原理、仪器设备等均是在查阅国内外文献资料的基础上，结合标准编写小组成员多次实验的基础上首次编写而成，主要创新点如下：（1）在方法原理部分，基于抗原抗体反应的双抗夹心酶联免疫吸附DAS-ELISA或普通PCR、实时荧光RT-PC

8、R，并根据生物学特性进行检测鉴定。（2）在仪器设备部分，对所用到的仪器设备的规格、数量进行了具体规范，所用试剂均为分析纯或生化试剂。在抽样及样品制备部分，规定了对种苗的取样部位和取样量。（3）在检测方法部分详细描述了酶联免疫吸附测定、PCR检测、实时荧光RT-PCR检测、生物学测定的操作步骤。四、知识产权说明根据查新结果，由于番茄黄化曲叶病毒病不是中国源发的病害，属外来入侵病害，国内外尚未见同类标准