药敏试验培训资料.ppt

《药敏试验培训资料.ppt》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、药敏试验医院感染近年来已成为全球性的突出问题，其主要原因之一是抗菌药物的使用不当促进耐药菌在病人体内和医院环境中定植繁衍，进而导致的交叉感染和内源性感染日益增多。合理使用抗菌药物的前提之一是要重视感染病原学的实验室诊断和监控抗感染治疗的实验室服务。为临床抗感染治疗的药物选择以及疗效的监测和考核提供实验室依据是临床微生物实验室的重要职能之一。药物敏感试验包括体外抗菌药物敏感试验、体内抗菌药物活性的测定和药物浓度的测定。体外抗菌药物敏感试验包括抑菌试验、杀菌试验、联合药敏试验和检测细菌产生的抗生素灭活酶。常用的体外抗菌药物敏感试验有纸片扩散法、稀释法和E试验法。

2、本章仅对临床微生物实验室常用的体外药敏试验的基本原理和方法进行介绍。一、临床常用的抗菌药物抗菌药物是指具有杀菌或抑菌活性的抗生素和化学合成药物。1.青霉素类抗生素2.头孢菌素类抗生素3.其他-内酰胺类抗生素4.氨基糖甙类抗生素5.喹诺酮类抗生素6.大环内酯类抗生素7.四环素、氯霉素和林可酰胺类抗生素8.糖肽类抗生素9.磺胺类药物及增效剂10.其他合成抗菌药二、抗菌药物敏感性试验（一）抗菌药物敏感性试验的意义抗菌药物敏感性试验（antimicrobialsusceptibilitytest,AST）意义在于：1.可预测抗菌治疗的效果，既AST试验结果为“敏感”

3、时，治疗可能有效；试验结果为“耐药”时，使用该药物治疗肯定失败；2.指导临床医生选择使用抗生素，AST的结果往往在给予病人经验性治疗24~48h之后，若AST结果为“敏感”，该治疗为有效，若结果为“耐药”，即应更换药物；3.提供所选择药物的依据；4.监测耐药性，分析耐药菌的变迁，掌握耐药菌感染病的流行病学，控制和预防耐药菌感染的发生和流行。（二）药敏试验方法1纸片扩散法1）K-B纸片琼脂扩散法（1）原理：将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上。纸片中所含有的药物吸取琼脂中的水分溶解后便不断地向纸片周围区域扩散形成递减的梯度浓度。在纸片周围抑菌浓

4、度范围内测试菌的生长被抑制，从而形成透明的抑菌圈。抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度。并与该药对测试菌的最低抑菌浓度（MIC）呈负相关关系，即抑菌圈愈大，MIC愈小。2.抗菌药物纸片：选择直径6.35mm的新华滤纸含药物纸片，-20℃保存。3.培养基：用水解酪蛋白（Mueller-HintonMH）琼脂。琼脂厚度4mm。9cm内径的平板需倾注25-30ml琼脂，7cm内径的平板需倾注15ml琼脂。对于营养要求高的细菌在MH琼脂基础上加入血清或血液。4.操作步骤：接种在已分纯的待测菌平板上挑取4~5个菌落35℃4~6h3~5mlMH肉汤中用肉汤调整菌液

5、至15min内0.5个麦氏管（1.5х108/ml）用无菌棉签均匀涂布平板（涂布3次，每次旋转平板60度，最后沿平板内缘涂抹1周）室温5分钟后贴纸片（各纸片中心相距应大于24mm，纸片距平板内缘应大于15mm）35℃16-18h观察结果5.结果判断：量取抑菌圈直径抗菌药物敏感性标准分为以下三级：敏感：表示测试菌能被测定药物常规剂量给药后在体内达到的血药浓度所抑制或杀灭。中度敏感(中介)：指测试菌可被测定药物大剂量给药后在体内能达到的浓度所抑制，或在测定药物浓集部位的体液中，如尿中被抑制。耐药：表示测试菌不能被在体内感染部位可能达到的抗菌药物浓度所抑制。6.

6、影响因素（1）培养基的质量，如PH、深度、硬度和表面湿度等；（2）药敏纸片的质量，含药量和保存方式；（3）接种菌量正确与否是影响结果的重要因素之一，取决于比浊标准的配制，正确使用和保存；（4）试验操作质量：接种细菌后贴片时5~15分钟；（5）孵育条件，温度和时间：培养时间16~18h,不要超过24h。7.质量控制采用标准菌株：金黄色葡萄球ATCC25923，大肠埃希菌ATCC25922，和铜绿假单胞菌ATCC278532）直接纸片药敏法由确证感染部位采集到的一些重要临床标本直接涂布接种MH琼脂或5%羊血MH琼脂，然后放置药敏纸片。不仅可提早24h

7、得出初步药敏结果供临床用药参考，还有助于发现混合感染中的不同菌种、耐药菌株以及病原菌的鉴定。但由于此法难以控制接种菌量，且标本中可能存在多种细菌，因此还需要在病原菌分纯后再用K—B法对其进行验证和补充。2稀释法1） 肉汤稀释法包括试管稀释法和微量稀释法。下面重点讲述试管稀释法（常量稀释法）。（1）. 原理：以水解酪蛋白（MH）液体培养基将抗生素作不同浓度的稀释，然后种入待测细菌，定量测定抗菌药物对被测菌的最低抑菌浓度(MIC)或最低杀菌浓度（MBC）。最低抑菌浓度（minimalinhibitoryconcentration,MIC）：细菌生长被完全抑制的最

8、低药物浓度为该药对测试菌的MIC。最低杀菌浓度（mi