枯草芽孢杆菌.pdf

《枯草芽孢杆菌.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、芽孢杆菌属的一种。单个细胞0.7～0.8×2～3微米，着色均匀。无荚膜，周生鞭毛，能运动。革兰氏阳性菌，芽孢0.6～0.9×1.0～1.5微米，椭圆到柱状，位于菌体中央或稍偏，芽孢形成后菌体不膨大。菌落表面粗糙不透明，污白色或微黄色，在液体培养基中生长时，常形成皱醭。需氧菌。可利用蛋白质、多种糖及淀粉，分解色氨酸形成吲哚。有的菌株是α-淀粉酶和中性蛋白酶的重要生产菌；有的菌株具有强烈降解核苷酸的酶系，故常作选育核苷生产菌的亲株或制取5'-核苷酸酶的菌种。在遗传学研究中应用广泛，对此菌的嘌呤核苷酸的合成途径

2、与其调节机制研究较清楚。广泛分布在土壤及腐败的有机物中，易在枯草浸汁中繁殖，故名。常用培养基配方：1L蒸馏水+10g蛋白胨+3g牛肉膏+15-20g琼脂能耐氧化；耐挤压；耐在快速繁殖过程中，产生大量多种维生素、有机酸、氨基酸、蛋白酶（特别是碱性蛋白酶）、糖化酶、脂肪酶、淀粉酶，高温，能长期耐60°C高温，在120°C温度下能存活20分钟芽孢染色法是利用细菌的芽孢和菌体对染料的亲合力不同的原理，用不同染料进行着色，使芽孢和菌体呈不同的颜色而便于区别。芽孢壁厚、透性低，着色、脱色均较困难，因此，当先用一弱碱性

3、染料，如孔雀绿（malachitegreen）或碱性品红（basicfuchsin）在加热条件下进行染色时，此染料不仅可以进入菌体，而且也可以进入芽孢，进入菌体的染料可经水洗脱色，而进入芽孢的染料则难以透出，若再用复染液（如番红液）或衬托溶液（如黑色素溶液）处理，则菌体和芽孢易于区分。（1）将培养24小时左右的枯草芽孢杆菌或其他芽孢杆菌，作涂片、干燥、固定。（2）滴加3—5滴孔雀绿染液于已固定的涂片上。（3）用木夹夹住载玻片在火焰上加热，使染液冒蒸汽但勿沸腾，切忌使染液蒸干，必要时可添加少许染液。加热时间

4、从染液冒蒸汽时开始计算约4—5分钟。这一步也可不加热，改用饱和的孔雀绿水溶液（约7．6％）染10分钟。（4）倾去染液，待玻片冷却后水洗至孔雀绿不再褪色为止。（5）用番红水溶液复染1分钟，水洗。（6）待干燥后，置油镜观察，芽孢呈绿色，菌体呈红色。】在pH为5.5~8.5时生长良好，最适生长温度为370一、目的要求1、学习分离、纯化噬菌体的基本原理和方法。2、学习噬菌体效价测定的基本方法。二、基本原理因为噬菌体是专性寄生物，所以自然界中凡有细菌分布的地方，均可发现奇特异的噬菌体的存在，亦即噬菌体是伴随着宿主细

5、菌的分布而分布的，例如粪便与阴沟污水中含有大量大肠杆菌，故也能很容易的分离到大肠杆菌噬菌体；乳牛场有较多的乳酸杆菌，也容易分离到乳酸杆菌噬菌体等。由于噬菌体侵入细菌细胞后进行复制而导致细胞裂解，噬菌体即从中释放出来，所以，（a）在液体培养基内可使混浊菌悬液变为澄清，此现象可指示有噬菌体存在；也可利用这一特性，在样品中加入敏感菌株与液体培养基，进行培养，使噬菌体增殖、释放，从而可分离到特异的噬菌体；（b）在宿主细菌生长的固体琼脂平板上，噬菌体可裂解细菌而形成透明的空斑，称噬菌体斑（图1），一个噬菌体产生一个

6、噬菌斑，利用这一现象可将分离到的噬菌体进行纯化与测定噬菌体的效价。本实验是从阴沟污水中分离大肠杆菌噬菌体，刚分离出的噬菌体常不纯，如表现噬菌斑的形态、大小不一致等，然后再进一步纯化。噬菌体的效价就是1毫升培养液中所含活噬菌体的数量。效价测定的方法，一般应用双层琼脂平板法。由于含有特异宿主细菌的琼脂平板上，一个噬菌体产生一个噬菌体斑，因此，能进行噬菌体的计数。二、器材37℃培养18小时的大肠杆菌斜面，阴沟污水；本实验均用普通肉膏蛋白胨培养基500毫升三角瓶内装三倍浓缩的液体培养基100毫升，试管液体培养基，

7、琼脂平板，上层琼脂培养基（含琼脂0.7%，试管分装，没管4毫升），底层琼脂平板（含培养基10毫升，琼脂2%）大肠杆菌18小时培养液，大肠杆菌噬菌体10-2稀释液（用肉膏蛋白胨液体培养基稀释）含0.9毫升液体培养基的小试管4支，肉膏蛋白胨琼脂平板（10毫升培养基，2％琼脂，作底层平板用），含4毫升琼脂培养基的试管（0.7％琼脂，作上层培养基用）5管，灭菌小试管5支，灭菌1毫升吸管10支，48℃水浴箱等。灭菌吸管，灭菌玻璃途布器，灭菌蔡氏细菌滤器，灭菌抽滤器，恒温水浴箱，真空泵等。1、噬菌体的分离（1）制备菌

8、悬液取大肠杆菌斜面一支，加4ml无菌水洗下菌苔，制成菌悬液。（2）增殖培养于100ml三倍浓缩的肉膏蛋白胨液体培养基的三角烧瓶中，加入污水样品200ml与大肠杆菌悬液2ml，37℃培养12～24小时。（3）制备裂解液将以上混合培养液2500r/min离心15分钟。将以灭菌的蔡氏过滤器用无菌操作安装于灭菌抽滤瓶上，用橡皮管连接抽滤瓶与安全瓶，安全瓶再连接于真空泵（如图2）。图上的真空表接或不接均可。将离心上清夜倒入滤器，开动真空