利用生物鉴定和分子鉴定的技术.doc

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1、利用生物鉴定和分子鉴定的技术定量分析评价水中粪便微生物的二氧化硫最大或然数摘要以前的研究表明，粪便微生物中硫化氢测试的灵敏度和特异性具有易变和不确定性，部分原因是其活跃程度导致的。此外，地下水样中检测出假阳性结果，而硫化氢阳性水样中不含粪便大肠杆菌或大肠杆菌。在其他的研究中也检测出了假阴性结果，而阴性硫化氢发现含有大肠杆菌。这种研究利用生物和分子的手段以及新颖定量检测模式鉴别自然水样中微生物群落成员的类型和数量，包括粪便指标和病原体以及其他的细菌。这项研究典型的水源检测包括水库、受保护的湖泊、农业灌溉井•和森林设置。水样的定量硫化氢检测是在检测和分离气单胞菌属、大肠杆菌属、产

2、硫化氢菌属以及沙门氏菌和志贺氏杆菌的选择培养基上通过涂布平板法进一步培养粪便细菌。利用生化方法使其与种群隔离以检测硫化氢的生产辨别其种属。末端限制性长度多态性是用来定量描述微生物群落多样性的分子手段。总的来说，它显示硫化氢细菌测试为阳性的水样也含有可能源IH粪便的细菌,而且水中含有的粪便病原体的硫化氢细菌测试也为阳性。利用末端限制性长度多态性分析从自然水体中分离出来的微生物以揭露一个相对稳定的生物群体，这个群体的组成会因为水源的不同和时间的推移而有所差异，其中有超过70%的微生物可以被识别。这些结果进一步证明了用以检测和量化水中粪便型污染的硫化氢测试的合理性。1.引文获取可以

3、接受微生物质量的饮用水降低介水传染病的风险，这种病在全世界范围内持续发生，尤其是发展中国家的小孩。然而，由于缺乏易得的合适的廉价的水质量检测手段，在发展中国家以及其他资源缺乏的地区检测水中微生物的质量仍然是一种挑战。习惯上，测量粪便污染物来评估水体质量需要有训练有素的分析师、专门的培养基以及其他支持材料和专门的实验室设施或者是便携式的现场分析工具。对于这样的微生物的水体质量检测的要求，很多发展中国家缺少专门的材料、基础设施和训练有素的分析师，而且这些测试很昂贵，平均每次测试需要花费5美元。硫化氢活跃程度的测试发展成为了一种低成本的选择，这种方法并不需要一个微生物实验室或细菌学

4、的现场测试设备，而且使用起来简单便捷、成本相对较低。留意到大肠型细菌在饮用水中的出现-般都与生产硫化氢的生物提的出现息息相关，于是基于通过硫化氢与铁反应在纸条上或水样容器中产生硫化铁沉淀的原理，开发了一•种测试。这种测试准备检测粪便来源的细菌，其中，有些细菌是能够减少有机硫转化为硫化物的，这些硫化物会迅速的和铁发生反应形成黑色沉淀。但是根据大多数测试都会有可能得到消极的结果的假说，Manja；sP/A测试的方式具有局限性。这启发人想到定量测试都会优先评估水源粪便污染的风险级别以及采取何种程度的措施来降低风险以求达到可接受水平的。这份报告里所描述评估的测试模式具有由Sobsey

5、和Pfaender提出的迎合鉴定需要的新颖的定量最大或然数的方法。这种测试方法的好处在于定量最大或然数的应用，易于分离、鉴定和列举产硫化氢的微生物，还有测试材料和供应的成本相对低廉。产生硫化氢的细菌种类有很多。在硫循环中，硫化氢是一个关键物质，多种微生物可以矿化和分解有机硫，氧化硫元素和无机物，例如：硫化物和硫代硫酸盐。亦或是减少硫酸盐和其他含硫阴离子。环境细菌中产硫化氢的-•个主要群体是硫酸盐还原菌。这些无所不在的细菌对于全球硫循环非常重要，而且他们生存在各种各样的地方，包括海水、淡水及其底泥中、土壤、生物膜、微生物垫、肠渣、白蚁肠道、黑烟囱的墙壁和联系到海洋蠕虫等。在表层

6、和此表层的热环境中，硫与分子氢结合产生硫化氢。如果淡水中硫的含量非常低，那么，在这个反应过程中，几乎没有底物被这些细菌所利用。然而，在水中硫含量高的地方，比如在地热环境中，硫酸盐还原菌在粪便污染的硫化氢测试中显示阳性。硫酸盐还原菌不会使复杂的有机化合物发生变化，像硫化氢测试方法中的底物，而会使必要的短链有机酸和其他的发酵产物发生改变。他们在硫化氢测试中可能不会生长以及显示阳性结果，因为被检测水样需要处于厌氧状态才能显示阳性结果，而且这可能需要24-48个小时的测试培养时间。地下水在含水层中也具有缺氧的潜力和并非来自于人或动物的细菌导致硫化物的形成,其中含有人类或动物的粪便，或

7、者含有自然或人为产生的还原性硫。此外，产硫化氢菌也可能会出现在含铁水域，其中包含其他铁代谢及相关腐蚀细菌。这些细菌可能是与粪便污染无关的。此外，水样中存在硫化物与铁的快速反应可以使得几乎一加入样品就产生一个立即变暗的H2S测试。不少研究者在热带和温带地区用多种类型的水测试和修改硫化氢的方法，包括秘鲁，智利，印度，尼泊尔，孟加拉国，澳大利亚，南非。这些研究比较了硫化氢的测试方法的结果与那些传统的细菌粪便污染指标的测试的测试结果。许多研究者试图在种属水平识别那些在硫化氢测试中显示阳性的细菌。Castillo