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时间:2020-09-07
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1、家教尊敬的家长:您好!您是否为您的孩子的成绩感到担忧?您是否经常看到您的孩子为作业和考试发愁?那么您是否想要您的孩子的成绩有所提高呢?这时,您将需要一个得力助手----家教。现如今,社会竞争的激烈程度,已完全超乎了我们的想象,你们的孩子比别的孩子多学点知识,就意味着,比别的孩子更强!个人简介:何同学,男,20岁,有家教经验。本人在校期间获得过国家励志奖学金,学校一等奖学金和二等奖学金多次,英语四级和计算机二级已顺利通过。辅导时间:周一至周六均可(两个小时/次)辅导课程:小学数学、英语初中数学、英语、物理、化学高中化学辅导价格:价格面议辅导方式:上门一对一联系方式:何同学MTT法检测细胞活性M
2、TT法检测细胞活性原理:活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶(SDH)能使MTT还原为甲瓒(formazan,水不溶性蓝紫色结晶);死细胞无此功能,二甲基亚砜(DMSO)可溶解细胞中甲瓒,用酶标仪在490nm波长处测定其吸光度(OD)值,在一定细胞数范围内,MTT结晶形成量与活细胞数成正比,活细胞数越多,OD值越大,细胞活性越强。MTT法检测细胞活性步骤:1MTT溶液配制:将MTT配制成5mg/mL溶液,溶剂为磷酸缓冲盐溶液(PBS);4℃避光保存即可。注意事项:MTT有致癌性,避免皮肤直接接触;2接种细胞:含10%胎牛血清的培养液配成单个细胞悬液,以每孔1000-10000个细胞接种于96孔培养板
3、中,每孔体积200uL;3细胞培养:将培养基移入CO2孵箱中,在37℃、5%CO2等适宜条件下培养,至细胞单层铺满孔底,贴壁(培养时间应根据实验目的和要求决定);加入一定浓度梯度的药物;45%CO2,37℃孵育16-48h,倒置于显微镜下观察。5每孔加入10uL,MTT溶液(5mg/ml,pH=7.4),继续培养4h,若药物与MTT能够反应,可先离心后弃去培养液,小心用PBS冲2-3遍后再加入含MTT培养液;6终止培养,吸去孔内培养液;7每孔加入100uLDMSO,置于摇床上低速振荡10min,使结晶物充分溶解;8在酶联免疫检测仪490nm处测量各孔吸光度值,以时间为横坐标,吸光度值为纵坐标
4、,绘制细胞生长曲线。
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