核与胞质蛋白提取方法

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1、细胞质与细胞核蛋白提取方法裂解液A：裂解液B：HEPES10mmol/L，pH7.9HEPES20mmol/L，pH7.9KCl10mmol/LNaCl420mmol/LMgCl21.5mmol/LMgCl21.5mmol/LDTT1mmol/LDTT0.5mmol/L甘油5%甘油25%EDTA0.2mmol/LEDTA0.2mmol/LNP-401%PMSF（使用前加入）1mmol/LPMSF（使用前加入）0.5mmol/Laprotinin3mg/Laprotinin5mg/Lleupeptin3mg/Lleupeptin5mg/LpepstainA2mg

2、/LpepstainA3mg/L注意：红色斜体字成分可用蛋白酶抑制剂混合物代替，使用前加入方法如下：1.将细胞收集到EP管中，离心（4000r/min，5min，4度)。2.用PBS洗三次，离心同上，弃上清。3.加入100微升缓冲液A，冰上孵育10min，离心（14000r/min，1min），弃上清。4.将沉淀重悬于60微升缓冲液B中，混匀，冰上30min，离心（14000r/min，15min，0度),收集上清，弃沉淀。（核蛋白提取后可用裂解液A透析2h，合并用于IP；或用其他溶液稀释后用浓缩离心管替换溶液后用于IP或其他实验）裂解液A的作用主要用于释放胞

3、浆蛋白和膜蛋白，裂解液B用于释放核蛋白，NP-40既是一种表面活性剂又是一种去垢剂，它的作用是既可破坏细胞膜（较温和），又可结合释出的蛋白防止沉淀，所以通过第一步离心去上清后大部分胞浆蛋白和膜蛋白可去掉。