实验1大肠杆菌的培养和分离ppt课件.ppt

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1、生物技术实践实验1大肠杆菌的培养和分离实验2分离以尿素为氮源的微生物实验4果汁中的果胶和果胶酶实验6α－淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测实验8果酒及果醋的制作实验10泡菜的腌制和亚硝酸盐的测定实验11植物的组织培养实验1大肠杆菌的培养和分离实验目的:1.进行大肠杆菌的扩增，利用液体培养基进行细菌培养的操作2.进行大肠杆菌的分离,用固体平板培养基进行细菌的划线培养3.说明大肠杆菌培养的条件和操作要求的原理基本概念微生物菌落、单菌落培养基LB培养基（液体、固体）划线分离法、涂布分离法灭菌和消毒培养和分离一、基础知识指的是结构简单、形体微小的单细胞、多细胞或没有细胞结构的低等生物。如酵

2、母、细菌、放线菌、霉菌、蓝细菌和病毒等。蓝细菌酵母菌病毒大肠杆菌（一）微生物大肠杆菌革兰氏阴性、兼性厌氧的肠道杆菌，在肠道中一般对人体无害，但也有一些菌株是对人体有害的，可以侵袭肠粘膜并产生毒素。但是，任何大肠杆菌如果进入人的泌尿系统，都会对人体产生危害。大肠杆菌也是基因工程技术中被广泛采用的工具。它以分裂方式繁殖，分裂速度较快。小资料：革兰氏染色法是一种用于细菌的染色法。此法将细菌分为两大类，即革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。所谓革兰氏阳性就是用革兰氏染液染色后，再用脱色液处理，细菌仍保留染色液的颜色；革兰氏阴性则相反。这两种细菌的差别在于细胞壁的成分不同。单个或少数细菌在固体培养基

3、上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。单菌体在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做单菌落。菌落是鉴定菌种的重要依据。单菌落分离法是消除污染杂菌的通用方法，也是用于筛选高表达量菌株的最简便方法之一。（二）菌落、单菌落划线分离法和涂布分离法的优缺点划线分离法的操作不能使用脱脂棉，否则容易吸水，造成污染。一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的；二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。（三）培养基由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的

4、混合营养液。LB（Luria-Bertani）液体培养基：蛋白胨10g/L，酵母提取液5g/L，氯化钠10g/L。LB（Luria-Bertani）固体培养基：50mlLB（Luria-Bertani）液体培养基中再加入1g琼脂制得。（可用于大肠杆菌的扩大培养）（可用于大肠杆菌的划线分离）通用的细菌培养基：培养基的配制1、原则根据所培养的微生物种类、培养目的等，选择原料配制培养基。如：细菌喜荤(用蛋白胨和酵母提取物来配制，加入一定量的氯化钠维持渗透压），霉菌喜素（用无机物或添加蔗糖的豆芽汁）营养要协调不管哪种培养基，一般都含有碳源、氮源、水、无机盐和生长因子等营养物质，另外还需要满

5、足微生物生长对温度、pH、氧气、渗透压的要求。细菌通常中性偏碱，霉菌中性偏酸碳源为微生物提供生长繁殖所需碳元素的营养物质。如CO2、NaHCO3、糖类、脂肪酸等。凡是能为微生物提供所需氮元素的营养物质。有铵盐、硝酸盐、尿素、牛肉膏、蛋白胨等。氮源定义常见种类碳源能为微生物提供所需碳元素的营养物质CO2、NaHCO3、糖类、脂肪酸氮源能为微生物提供所需氮元素的营养物质铵盐、硝酸盐、尿素、牛肉膏、蛋白胨生长因子微生物生长不可缺少的微量有机物。有些微生物可自身合成。氨基酸、维生素、碱基等。一些天然物质，如酵母膏、牛肉膏、蛋白胨、动植物组织提取液可为微生物提供生长因子水无机盐维持渗透压微生

6、物所需的营养物质及常见种类LB培养基(通用的细菌培养基)蛋白胨0.5g，酵母提取物0.25g，氯化钠0.5g,水50mL（液体培养基）再加1g琼脂，配成固体培养基2、培养基分类液体培养基固体培养基半固体培养基选择培养基鉴别培养基基础培养基…物理状态01成分02用途合成培养基半合成培养基天然培养基03培养基的用途液体培养基：扩大培养、工业生产固体培养基：分离纯化，鉴定菌种、计数、保藏菌种选择培养基和鉴别培养基例1：在培养基中加入青霉素，以抑制细菌、放线菌的生长，从而分离到酵母菌和霉菌。例2：在培养基中加入高浓度的食盐可以抑制多种细菌的生长，但不影响金黄色葡萄球菌的生长，从而可以将该菌

7、分离出来。例3：在培养基中加入伊红和美蓝，如果有大肠杆菌，菌落呈深紫色，并带有金属光泽。（三）无菌技术泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。1、常用消毒方法：（1）100℃煮沸5-6min（2）巴氏消毒法：70-75℃下煮30min或80℃下煮15min（3）用70%酒精等进行皮肤消毒（4）紫外线消毒消毒与灭菌的概念及两者的区别消毒：指杀灭病原微生物的方法；灭菌：指杀灭或清除环境中一切微生物（包括芽孢、孢子）的方法。（1）灼烧灭菌2、常用灭菌方法：（2）高