《基因工程的基本操作程序》ppt课件.ppt

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1、1.2基因工程的基本操作程序基因工程基本操作的四个步骤1、目的基因的获取2、基因表达载体的构建3、将目的基因导入受体细胞4、目的基因的检测与鉴定一、目的基因的获取1.目的基因主要是指编码蛋白质的结构基因2.目的基因的来源①从自然界中已有的物种中分离出来②用人工的方法合成一、目的基因的获取3.获取目的基因的方法A.从基因文库中获取B.利用PCR技术扩增C.人工合成A.从基因文库中获取目的基因基因文库基因组文库部分基因文库（如:cDNA文库）1.基因文库基因组文库与部分基因文库的关系基因组DNA文库cDNA文库基因组DNA文库与cDNA文库的比较补充知识点：

2、1.原核细胞的基因结构非编码区非编码区编码区编码区上游编码区下游与RNA聚合酶结合位点启动子终止子启动子：位于基因首端一段能与RNA聚合酶结合并能起始mRNA合成的序列。没有启动子，基因就不能转录。终止子：位于基因的尾端的一段特殊的DNA片断，它能阻碍RNA聚合酶的移动，并使其从DNA模板链上脱离下来，使转录终止。RNA聚合酶:能够识别启动子上的结合位点并与其结合的一种蛋白质.(以模板转录然后脱落)①不能转录为信使RNA，不能编码蛋白质。：能转录相应的信使RNA，能编码蛋白质编码区非编码区原核细胞的基因结构②有调控遗传信息表达的核苷酸序列，在该序列中，最

3、重要的是位于编码区上游的RNA聚合酶结合位点。非编码区非编码区编码区编码区上游编码区下游启动子终止子编码区非编码区非编码区与RNA聚合酶结合位点内含子外显子能够编码蛋白质的序列叫做外显子不能够编码蛋白质的序列叫做内含子启动子终止子编码区上游编码区下游内含子：外显子：补充知识点：2.真核细胞的基因结构真核细胞的基因结构编码区非编码区外显子：能编码蛋白质的序列内含子：不能编码蛋白质的序列：有调控作用的核苷酸序列，包括位于编码区上游的RNA聚合酶结合位点等。非编码序列：包括非编码区和内含子原核细胞真核细胞不同点编码区是_____的编码区是间隔的、_____的相

4、同点都由能够编码蛋白质的______和具有调控作用的______区组成的原核细胞与真核细胞的基因结构比较思考编码相同数目氨基酸的蛋白质，原核细胞与真核细胞基因结构一样长吗？连续不连续编码区非编码编码区非编码区非编码区与RNA聚合酶结合位点内含子外显子能够编码蛋白质的序列叫做外显子不能够编码蛋白质的序列叫做内含子启动子终止子编码区上游编码区下游内含子：外显子：补充知识点：2.真核细胞的基因结构2.DNA分子的复制需要哪些条件？1.DNA分子的复制的过程是怎样的？回忆碱基OHOOPOHOOHOOPOHO碱基OHOH脱氧核糖磷酸基团碱基脱氧核糖碱基碱基脱氧核糖

5、5′3′脱氧核苷酸链结构简图OOPOHO碱基OOHOOPOHOOH碱基5′5′3′3′参与的组分在DNA复制中的作用解旋酶打开DNA双链DNA母链提供DNA复制的模板4种脱氧核苷酸合成子链的原料DNA聚合酶催化合成DNA子链引物使DNA聚合酶能够从引物的3’端开始连接脱氧核苷酸选修一;P58①概念：PCR是一项在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。②原理：DNA双链复制③原料：模板DNA（已知基因的核苷酸序列）；DNA引物；四种脱氧核苷酸；热稳定DNA聚合酶（Taq酶）；离子B.利用PCR技术扩增目的基因④方法：DNA受热变性解旋为单链、冷却后DN

6、A引物与单链相应互补序列结合、DNA聚合酶作用下延伸合成互补链。指数增长归纳指数增长归纳a.变性（90-95℃）：双链DNA模板在热作用下，氢键断裂，形成单链DNAb.退火（复性55-65℃）：温度下降引物与DNA模板结合，形成局部双链c.延伸（70-75℃）：温度恢复，在Taq酶的作用下，从引物的5′端→3′端延伸，合成与模板互补的DNA链降温冷却升温（70—75℃），在耐高温的DNA聚合酶催化下形成DNA新链（延伸）反应过程样本DNA耐高温的DNA聚合酶两种引物提高温度（90～95℃），变性。循环进行DNA数量呈指数方式增加（55—60℃），退火。使

7、两种引物分别与模板DNA链互补结合PCR技术与体内DNA复制的主要区别：1.PCR不需要DNA解旋酶；体内DNA复制需要；2.PCR需要耐热的DNA聚合酶（Taq酶），而生物体内的聚合酶在高温时会变性；3.PCR不需提供能量，体内DNA复制需要能量。二、基因表达载体的构建——核心1、什么是转化？2、目的基因导入植物细胞常用的方法是什么？具体过程是怎样的？3、目的基因导入动物细胞常用的方法是什么？基本操作程序是怎样的？4、目的基因导入大肠杆菌的方法是怎样的？钙离子有什么作用？三、目的基因导入受体细胞转化目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达

8、的过程。三、目的基因导入受体细胞1.目的基因导入植物细胞常用的方法:农杆菌转化法