紫外原理及应用[1]

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1、紫外-可见分光光度计原理及应用1.基本原理:朗伯-比尔定律：在一定条件下（稀溶液、单色光），溶液的吸光度A与溶液的浓度C、光通过溶液的长度L成正比。即A=ECLE为常数，称为吸收系数，某物质指定浓度时的吸收系数C为溶液浓度L为光通过溶液的长度，单位cm2.吸收系数：百分吸收系数：溶液浓度为百分浓度时，单位%（g/ml）吸收系数称为百分吸收系数摩尔吸收系数：溶液浓度为摩尔浓度时，单位mol/L吸收系数称为摩尔吸收系数3.应用3.1定性鉴别3.1.1比较光谱的一致性：在鉴定时，试样和标准品配制成相同浓度的溶液，分别测定吸收光谱，比较两者

2、的光谱图是否一致3.1.2比较最大吸收波长及吸收系数一致性：紫外吸收光谱相同的两种化合物，其结构不一定相同，不同分子结构产生相同的紫外吸收光谱，但它们的吸收系数时有差别的，故比较吸收系数的一致性时常用的一种定性方法。如甲睾酮与丙酸睾酮，最大吸收波长均为238nm，但百分吸收系数的数值不同，甲睾酮为540，丙酸睾酮为4903.1.3比较吸光度比值的一致性：若物质的吸收峰较多，可用几个吸收峰处吸收度或吸收系数的比值作鉴别，如维生素B12收有三个吸收峰278、361、550nm就可用进行比较A361nm/A278nm=1.70~1.88A

3、361nm/A550nm=3.15~3.453.2杂质检查3.2.1纯度检查：利用不同化合物的紫外吸收不同进行杂质检查。如检查乙醇中是否含有杂质苯，苯在256nm处有最大吸收，乙醇在此波长处几乎无吸收，只要测定乙醇在256nm处是否有明显的吸光度即可3.2.2杂质的限量检查：药物中的杂质，标准一般都规定其限度，如检查肾上腺素中肾上腺酮杂质的量，就是测定肾上腺素在310nm处是否有吸收，无吸收表明杂质肾上腺酮不存在。3.3定量方法有对照品比色法、吸收系数法、比色法（分为目视法及光电比色法）2010-12-30