应用荧光定量PCR技术分析普通菜豆品种中尖镰孢菜豆专化型定殖量-论文.pdf

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1、作物学报ACTAAGRONOMICASINICA2012，38(5)：791—799http：／／www．chinacrops．org／zwxb／ISSN0496—3490；CODENTSHPA9E—mail：xbzw@chinajourna1．net．cnDoI：10．3724／SP．J．1006．2012．00791应用荧光疋定量里PrCRK技术分析普通菜豆品种中尖镰孢菜豆专化型定殖量薛仁风朱振东黄燕，2王晓鸣王兰芬王述民，‘中国农业科学院作物科学研究所，农作物基因资源与基因改良国家重大科学工程，北京100081；河北科技师范学院生命科技学院河北昌黎0666

2、00摘要：尖镰孢菜豆专化型(Fusariumoxysporumf．sp．phaseoli)~I起的菜豆枯萎病是菜豆生产中最严重的维管束类病害之一，防治该病害有效方法是利用抗病品种。因此，一种能够从菜豆受侵染组织中准确鉴定并定量检测枯萎病原菌含量的方法将有助于筛选抗性品种，应用于普通菜豆枯萎病抗病育种。本研究基于荧光定量PCR技术开发出一种能够对定殖于菜豆组织中的枯萎病原菌准确定量的新方法。该技术对根、茎组织中病原菌DNA的最低检测量为1Pg，能在接种病原菌6d后明显区分抗病性不同的品种，可在菜豆植株表现出明显发病症状前准确鉴定不同品种抗性水平的差异。经验证参试的

3、感病品种BRB一130和A0640—1根、茎组织中定殖的病原菌DNA量显著高于抗病品种260205和黑芸豆，与表型鉴定的结果完全符合。利用荧光定量PCR技术能够在病原菌侵染早期快速、准确、高效定量菜豆组织中定殖的病原菌，这对指导菜豆抗病育种和植物病害传播的研究都具有非常重要价值。关键词：普通菜豆；镰孢菌枯萎病；荧光定量PCR；定量分析QuantificationofFusariumoxysporumf．sp．phaseoliDetectedbyReal-timeQuantitativePCRinDifferentCommonBeansCultivarsXUERe

4、n．Feng，ZHUZhen．Dong，，HUANGYan，，WANGXiao．Ming，WANGLan—Fen，andWANGShu—Min，InstituteofCropScience，ChineseAcademyofAgriculturalSciences／NationalKeyFacilityforCropGeneResourcesandGeneticImprovement，Beijing100081，China；。CollegeofLifeScienceandTechnology，HebeiNormalUniversityofScience&Techn

5、ology，Changli066600，ChinaAbstract：Fusariumwilt．causedbyFusariumoxyspoFumfsp．phaseoli．isoneofthemostdevastatingvasculardiseasesofcoIIunonbean．AeficientwaytOpreventandcontrolthediseaseistouseresistantcultivars．soitisnecessarytodeveloparapidaccuratemethodfordetectingthepathogens．Inthiss

6、tudy．wedevelopedareal—timequantitativepolymerasechalnreaction(qRT—PCR)protocolthatquantifiedFoxysporumf．sp．phaseoliDNAtoaminimumof1pgintheplantrootsandstems．More—over．theqRT—PCRprotocolasymptomaticallydistinguishedresistantlevelofdifferentbeancultivarschallengedbythewiltpathogenFOP—D

7、M01at6dpostinoculation．TheresultindicatedFOP—DM01DNAquantificationsintherootsandstemsofsus—ceptibleBRB一130andA0640—1weresignificantlyhigherthanthoseinresistant260205andHeiyundou．whichabsolutelymatchedwiththephenotypicidentification．Theuseofthisprotocolforfast．reliable．andcost—effecfi

8、vequantifica